МедУнивер - MedUniver.com Все разделы сайта Видео по медицине Книги по медицине Форум консультаций врачей  
Рекомендуем:
Стоматология:
Стоматология
Анатомия полости рта
Детская и подростковая стоматология
КТ, МРТ, УЗИ полости рта и ЧЛХ
КЛКТ, КТ, рентген в имплантологии
Ортодонтия:
Ортодонтия
Высота окклюзии
Мини-имплантаты
Ортопедия:
Высота окклюзии
Протезирование коронками
Протезирование мостовидными протезами
Реставрация передних зубов
Штифтовые культевые конструкции (ШКК)
Пародонтология:
Пародонтология
Пластическая хирургия десны
Трансплантация кости (костная пластика)
Терапевтическая стоматология:
Терапевтическая стоматология
Реставрация передних зубов
Штифтовые культевые конструкции (ШКК)
Эндодонтия (эндодотическое лечение)
Хирургическая стоматология:
Хирургическая стоматология
Имплантология
Пластическая хирургия десны
Трансплантация кости (костная пластика)
Форум
 

Культуральные и иммунохимические исследования микрофлоры полости рта

Разработав список предполагаемых пародонтальных патогенов, стало возможным выполнять более целевые исследования, направленные только на выявление этой группы бактерий в большем количестве клинических образцов, а не на изучение всей культивируемой микробиоты. Эти исследования полагаются на сочетание идентификационных подходов: новых селективных сред для обогащения или селективной культуры определенных бактерий; иммунологических методов с использованием недавно разработанных моноклональных антител или поливалентной сыворотки к отдельным видам, или микроскопии для выявления спирохет.

К примеру, Bragd et al. (1987) использовали селективные среды для оценки ассоциации Actinobacillus (теперь Aggregatibacter) actinomy-cetemcomitans, Bacteroides (теперь Porphyromonas) gingivalis и Bacteroides (Prevotella) intermedia более чем из 200 образцов участков с прогрессирующим и непрогрессирующим пародонтитом.

Точно так же Slots et al. (1990) использовали культуральный подход для изучения влияния возраста на распространенность и повторный рост A. actinomycetemcomitans и В. intermedius у 1624 пациентов в возрасте от 15 до 89 лет. Grossi et al. (1995) использовали иммунохимический подход к оценке восьми предполагаемых патогенов пародонта в исследовании с участием 1361 субъекта с целью выявления маркеров риска потери костной ткани пародонта.

Suda et al. (2002) использовали подход непрямой иммунофлюоресценции для регистрации количества Eikenella corrodens более чем в 250 образцах пародонта и контрольных образцах, a Riviere et al. (1997) — аналогичное исследование с антителами и микроскопией образцов для определения количества спирохет при развитии заболеваний пародонта с использованием более 1000 образцов от 65 индивидуумов.

Культуральный и микроскопический анализ зубного налета
Рисунок 3. Культуральный и микроскопический анализ зубного налета. Чашки с первично выделенными колониями из поддесневого налета у пациента с хроническим пародонтитом. Колония, окрашенная черным пигментом, — изолят Porphyromonas gingivalis (а); пациент с хроническим пародонтитом. В последнем случае темно-пигментированные колонии были изолятами Prevotella intermedia (б). Микрофотография образца поддесневого налета у пациента с выраженным хроническим пародонтитом, темнопольная микроскопия (в). В образце доминируют крупные спирохеты с типичным штопорообразным видом.

Концентрация внимания на небольшой группе предполагаемых микроорганизмов и использование методов с относительно высокой производительностью дали возможность разработать статистически подкрепляемые исследования для решения ряда ключевых вопросов, имеющих отношение к этиологии и лечению заболеваний пародонта. К их числу относятся исследования наличия предполагаемых пародонтопатогенов в различных глобальных популяциях (van Winkelhoff et al., 1999); ассоциаций между различными организмами, такими как Bacteroides forsythus и Bacteroides gingivalis (Gmur et al., 1989), а также их пространственного распределения в налете (Kigure et al., 1995); ассоциаций с заболеванием различных морфотипов одних и тех же видов, таких как гладкие и шероховатые типы колоний Peptostreptococcus micros (van Dalen et al., 1998; Kremer et al., 2000); и эффекта лечения при персистенции/эрадикации данных ключевых микроорганизмов (Mandell et al., 1986; Rodenburg et al., 1990; Mombelli et al., 2000). Кроме того, когда выделение и идентификация конкретного организма были связаны с более детальной характеристикой индивидуального штамма (к примеру, путем рестрикционного расщепления ДНК бактерий с последующим разделением электрофорезом в агарозном геле), стало возможным исследовать передачу микроорганизмов от человека к человеку. Следует отметить, что Petit et al. (1993а, б) и Van Steenbergen et al. (1993) использовали этот подход, чтобы продемонстрировать передачу штамма Р. gingivalis между супругами, а также для того, чтобы доказать возможность внутрисемейной передачи отдельных штаммов Р. intermedia и Prevotella nigrescens.

Другие исследователи использовали эти селективные методики для изучения связи других видов бактерий с заболеваниями пародонта в дополнение к уже установленным и изученным возбудителям. В результате перечень видов бактерий, положительно связанных с болезнью пародонта, в частности, у взрослых, был расширен, так что в него были включены Wolinella recta (теперь Campylobacter) (Lai et al., 1992; Rams et al., 1993), Enterococci (Rams et al., 1992), Peptostreptococcus micros (van Dalen et al., 1998), некоторые виды эубактерий (Grossi et al., 1995), E. corrodens (Suda et al., 2002) и Fusobacterium nucleatum (van Winkelhoff et al., 2002). Таким образом, многие исследователи по-прежнему рассматривают специфическую микробную этиологию заболеваний пародонта как наиболее разумную интерпретацию накопленных данных.

Эти данные позволяют считать, что микробное воздействие, особенно в случае хронического пародонтита взрослых, — весьма сложный процесс и, вероятно, существенно варьирует у разных пациентов и, возможно, у одного пациента в зависимости от времени возникновения и на разных участках пародонта (Maiden et al., 1990).

В отличие от хронического пародонтита у взрослых, в одном конкретном случае AgP, поражающего подростков африканского происхождения, есть основания полагать, что болезнь может быть вызвана одним специфическим микроорганизмом. A. actinomycetemcomitans — грамотрицательная палочка, синтезирующая лейкотоксин, который специфически лизирует нейтрофилы человека.

Несмотря на значительное генетическое разнообразие данного микроорганизма, один конкретный клон, называемый JP2, имеет ряд генетических вариаций, которые отличают его от других клонов, в том числе делеции 530-й пары оснований в премоторной области оперона лейкотоксин-гена.

В результате клон JP2 производит значительно больше лейкотоксина по сравнению с другими бактериями того же вида: это теоретически может привести к увеличению возможности разрушения иммунной защиты пародонта. Популяционный генетический анализ с помощью мультилокусной последовательности штаммов A. actinomycetemcomitans, полученных от пациентов в географически разных областях, позволяют предположить, что клон JP2 первоначально появился в качестве отдельного генотипа в средиземноморской части Африки более 2000 лет назад и впоследствии распространился на Западную Африку, откуда с рабами был перенесен в Северную и Южную Америку в XVI-XVIII вв.

Примечательно, что, несмотря на глобальное распространение, клон JP2 ассоциируется исключительно с пациентами западноафриканского происхождения, что указывает на сильное влияние тропизма хозяина (Haubek et al., 2008). В то время как распространенность AgP у подростков, как правило, <1%, она намного выше у пациентов, происходящих из Северной и Западной Африки. В долгосрочном исследовании заболевания у 61 из 428 марокканских подростков (14,3%) с исходно здоровым пародонтом через 2 года развилась болезнь. Кроме того, в этой группе люди, у которых клон JP2 был выявлен в начале исследования, оказались гораздо больше подвержены риску развития заболевания, чем те, кто не был носителем клона JP2 (относительный риск 18,0 против 3,0) (Haubek et al., 2008). Следовательно, клон JP2 A. actinomycetemcomitans имеет характеристики традиционного бактериального патогена, хотя и с ограниченным кругом хозяев.

- Также рекомендуем "Методы идентификации бактерий полости рта, основанные на определении нуклеиновых кислот"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 25.11.2022

Медунивер Мы в Telegram Мы в YouTube Мы в VK Форум консультаций врачей Контакты, реклама
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.