Влияние иммуномодуляторов на дендритные клетки. Морфология дендритных клеток
Фазово-контрастная микроскопия дендритных клеток, полученных в лабораториях клеточного иммунитета РОНЦ им. Н.Н. Блохина и терапевтических вакцин НИИ им. ИИ. Мечникова РАМН из клеток костного мозга и клеток эмбриональной печени мышей, выявляла звездчатые клеточные формы с характерными цитоплазматическими отростками, что соответствует описанию ДК другими исследователями.
Морфологическую характеристику дендритных клеток изучали совместно с д-ром. мед. наук О.В. Лебединской. Клетки, прилипшие к пластику культурального флакона, имели вуалевидный характер с многочисленными длинными тонкими отростками на поверхности.
Клетки при культивировании в течение семи суток без внесения в культуральную среду индукторов созревания характеризовались нежной цитоплазмой вуалевидного характера, при активации ДК иммуномодуляторами микробного происхождения (ИММП), а также TNF-a, приобретали многочисленные отростки, характерные для зрелых клеток. При этом цитоплазма становилась более плотной.
Электронномикроскопические исследования показали, что во взвеси дендритных клеток, генерированных как из клеток костного мозга, так и из клеток эмбриональной печени мышей, выявляются типичные электронно-микроскопические признаки зрелых дендритных клеток — наличие многочисленных длинных (более 10 мкм) цитоплазматических отростков нитевидной и вуалевидной формы или в виде луковичных псевдоподий, которыми они контактируют с клетками микроокружения.
Клетки имеют крупные размеры, округлую форму, эксцентрично расположенное дольчатое ядро, чаще неправильной формы с хроматином, расположенным по периферии.
Цитоплазма содержит многочисленные вакуоли разной величины, внутри которых выявляются разнообразные включения. Внутри клеток определяются развитые синтетические органоиды: большое количество эндосом, лизосом, хорошо развитый аппарат Гольджи, митохондрии и многочисленные элементы гладкой и шероховатой эндоплазматичес-кой сети.
Цитоплазма дендритных клеток содержит многочисленные вакуоли разной величины, внутри которых выявляется разнообразное содержимое. Клетки имеют развитые синтетические органоиды: митохондрии, гранулярную эндоплазматическую сеть, рибосомы, полирибосомы и аппарат Гольджи. По Романовскому—Гимзе цитоплазма зрелых ДК окрашивается базофильно, при окраске по Браше в ней определяется яркий пиронинофильный компонент, свидетельствующий о наличии в клетках большого количества РНК.
Обработка Шифф-реактивом выявляет в цитоплазме ШИК-положительные гранулы, интенсивность окраски которых слегка уменьшается после воздействия амилазой, что говорит о наличии в клетках как гликогена, так и гликозаминогликанов.
После добавления в культуру дендритных клеток мышей TNF-a, несколько изменялись гистохимические характеристики дендритных клеток. Цитоплазма приобретала более яркую пиронинофильную окраску, отражающую повышенное содержание в ней РНК, возрастало также содержание гликогена и гликозаминогликанов (ШИК-положительные гранулы при окраске по Шабадашу имели более крупные размеры и увеличивались в количестве). Пиронинофильные ядрышки в ядрах становились более крупными и многочисленными. В мазках появлялись клетки с морфологическими и гистохимическими характеристиками ДК в состоянии митотического и амитотического деления и многочисленные властные формы. Аналогичные морфологические и гистохимические особенности характеризовали ДК после активации культур иммуномодуляторами микробного происхождения.
Таким образом, применение иммуномодуляторов микробного происхождения (Иммуновак-ВП-4, ГМДП) и TNF-a позволяет получить зрелые ДК, характеризущиеся типичной морфологией: крупные округлые клетки, с эксцентрично расположенным ядром, и наличием специфических выростов на поверхности клетки.
