MedUniver Физиология человека
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Эндокринная система
Пищеварительная система
Физиология клеток крови
Обмен веществ. Питание
Выделение.Функции почек
Репродуктивная функция
Сенсорные системы
Физиология иммунной системы
Система кровообращения
Дыхательная система
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Фагоцитарная активность дендритных клеток. Иммунофенотип дендритных клеток

Дендритные клетки, полученные из клеток костного мозга мышей, были протестированы на способность к фагоцитозу. Фагоцитарную активность ДК на различных стадиях дифференцировки, активированных Иммуновак-ВП-4, АСО и классическим индуктором созревания TNF-a, оценивали по поглотительной способности в отношении штаммов S. aureus и S. typhimurium. В качестве контроля были использованы макрофаги, которые получали из тех же клеток костного мозга, путем культивирования их с GM-CSF в течение 7 суток.
Незрелые дендритные клетки более активно фагоцитировали бактерии в отличие от ДК, обработанных Иммуновак-ВП-4, АСО и TNF-a.

Фагоцитарная активность макрофагов и дендритных клеток была в динамике изучена в отношении S. aureus и S. typhimurium.
Наиболее активными были макрофаги, фагоцитарный индекс у них по отношению к S. aureus уже через 30 мин инкубации составлял 86,0±4,8 %, и он оставался на высоком уровне в течение трех часов наблюдения.

Фагоцитарная активность незрелых ДК и стимулированных иммуномодуляторами микробного происхождения значительно отличались.
При добавлении в среду культивирования TNF-a или Иммуновак-ВП-4 (группы 2 и 3) фагоцитарная активность была существенно ниже, причем при прибавлении Иммуновак-ВП-4 фагоцитарный индекс был несколько выше, чем в случае созревания ДК под влиянием TNF-a. Под воздействием АСО также отмечалось снижение фагоцитоза ДК, однако его уровень был выше по сравнению с Иммуновак-ВП-4, что может свидетельствовать о наличии в культуре незрелых ДК и макрофагов. При сопоставлении степени фагоцитоза S. aureus и S. ty-phimurium существенных различий не выявлено.

Вполне вероятно, что более высокая активность поглощения бактерий дендритными клетками, стимулированными Иммуновак-ВП-4 и АСО, обусловлена экспрессией Toll-подобных рецепторов на ДК и макрофагах, которые обладают сродством к патоген-ассоциированным структурам бактерий. После взаимодействия с бактериальными продуктами, ДК переходят в новое функциональное состояние, выражающееся в снижении фагоцитарной активности и способности к более мощной презентации антигена по сравнению с макрофагами.

Изучение иммунофенотипических характеристик дендритных клеток на разных стадиях их созревания проводили с использованием флюоресцеинизотиоцианат и РЕ-меченых моноклональных антител фирмы «Caltag», США.

дендритные клетки

Степень дифференцировки и зрелости дендритных клеток, полученных из клеток эмбриональной печени мышей, определяли по изменению уровня экспрессии дифференцировочных молекул CD34, CD38, CD40, CD80, CD86, CD83, F4/80, МНС I, МНС II через 3 суток после добавления к незрелым дендритным клеткам Иммуновак-ВП-4, бактериального лизата К. pneumoniae или TNF-a.

Полученные данные свидетельствуют о том, что TNF-a и Иммуновак-ВП-4 в исследуемых концентрациях стимулировали созревание ДК. Однако, судя по экспрессии дифференцировочных маркеров, TNF-a активировал созревание ДК в большей степени, чем Иммуновак-ВП-4 и лизат К. pneumoniae. Концентрация 25 мкг/мл Иммуновак-ВП-4 оказалась оптимальной для индукции созревания ДК; в этих условиях уровень экспрессии костимулирующих молекул был более высоким. Однако экспрессия Р4/80-молекул на ДК, стимулированных Иммуновак-ВП-4 и лизатом К. pneumoniae, оставалась повышенной (23,8±2,6 % и 21,2±3,4 %, соответственно) по сравнению с ДК, обработанными TNF-a (0,6±0,2 %).

Был исследован также иммунофенотип дендритных клеток, полученных из клеток костного мозга мышей. В качестве индукторов созревания использовали иммуномодуляторы бактериального происхождения — Иммуновак-ВП-4, ГМДП, АСО, а в качестве контроля — лизат и ЛПС К. pneumoniae и TNF-a.

Активация клеток с помощью Иммуновак-ВП-4 и ГМДП приводила к созреванию клеток. Усиливалась экспрессия костимулирующих молекул, адгезивной молекулы CD38. При этом используемые концентрации Иммуновак-ВП-4 по-разному влияли на уровень МНС. При дозе 25 мкг/мл экспрессия МНС I была в 2,7 раза больше, чем при концентрации 50 мкг/мл. Экспрессия МНС II была высокой при обеих дозах и не имела существенных отличий. ГМДП увеличивал содержание ДК, экспрессирующих МНС II класса.

Использование лизата и ЛПС К. pneumoniae повышало уровень экспрессии костимулирующих молекул, молекул антигенного представления МНС I и II.

При использовании АСО в качестве индуктора созревания ДК экспрессия маркера CD34 претерпевала существенные изменения в зависимости от дозы. Его динамика отмечена только при максимальных дозах. При применении АСО в дозе 0,3 ЕС/мл увеличивалось содержание CD80, CD86, МНС I экспрессирующих клеток. Однако уровень CD86 был ниже, чем при использовании других индукторов созревания. Экспрессия маркера F4/80 на ДК, стимулированных Иммуновак-ВП-4, может быть связана с присутствием в вакцине бактериальных ЛПС. Эти результаты подтверждаются полученными ранее данными о способности ДК, обработанных ЛПС, экспрессировать не только антигены зрелых ДК, но и рецепторы к ЛПС.

В следующих экспериментах изучали экспрессию этих маркеров при комбинации имммуномодуляторов микробного происхождения (ИММП) с TNF-a. Культивирование ДК в присутствии GM-CSF и IL-4 с добавлением на шестые сутки 2,5 нг/мл TNF-a и ИММП стимулировало созревание ДК в большей степени, чем эта доза TNF-a, и снижало в культуре содержание макрофагов. Сам по себе TNF-a в концентрации 2,5 нг/мл (группа 3) не вызывал созревания ДК по сравнению с контролем (группа 2), маркер незрелости CD34 был выше в 5 раз, F4/80 — в 11,4 раза, что свидетельствует о наличии в культуре существенного процента макрофагов. Однако при коинкубации 2,5 нг/мл TNF-a с иммуномодуляторами происходило увеличение экспрессии адгезивной молекулы CD38, костимулирующих молекул CD40, CD80, CD86, а также МНС I и II класса.

Особенно это касается АСО, поскольку коинкубация его с TNF-a стимулировала экспрессию поверхностных маркеров, присущих ДК. При этом снижался маркер CD34 по сравнению с незрелыми ДК (группа 1) в 3,4 раза, увеличивалась экспрессия адгезивной молекулы CD38 в 3,2 раза, костимулирующих молекул CD40 в 38 раз, CD80 и CD86 почти в 9 раз, МНС I в 2,7 и МНС II в 1,5 раза, уровень макрофагального маркера снижался в 3,6 раза. При внесении в среду культивирования TNF-a и Иммуновак-ВП-4 также выявлена стимуляция эффекта, выразившегося в том, что существенно увеличилась экспрессия МНС I и II и снизилось содержание F4/80 по сравнению с действием Иммуновак-ВП-4 в той же дозе (табл. 7). Близкие результаты получили при комбинации TNF-a (2,5 нг/мл) и ГМДП, но экспрессия CD40, CD80, CD86 и МНС II была больше в случае комбинации TNF-a и Иммуновак-ВП-4.
Полученные данные свидетельствуют, что внесение в среду культивирования небольшого количества TNF-a повышает потенциал созревания ДК под воздействием иммуномодуляторов микробного происхождения.

- Читать далее "Действие иммуномодуляторов на активацию дендритных клеток. Созревание дендритных клеток"


Оглавление темы "Дендритные клетки и естественные киллеры иммунитета":
  1. Анатоксин стафилококковый очищенный (АСО). Укрепление иммунитета стафилококковым анатоксином
  2. Ликопид как иммуномодулятор. Механизмы стимуляции иммунитета ликопидом
  3. Клеточные элементы врожденного иммунитета. Дендритные клетки
  4. Лимфоидные или плазмацитоидные дендритные клетки. Функции дендритных клеток
  5. Миелоидные дендритные клетки. Фолликулярные, опухоль-ассоциированные дендритные клетки
  6. Влияние иммуномодуляторов на дендритные клетки. Морфология дендритных клеток
  7. Фагоцитарная активность дендритных клеток. Иммунофенотип дендритных клеток
  8. Действие иммуномодуляторов на активацию дендритных клеток. Созревание дендритных клеток
  9. Естественные киллеры (NK). Функции естественных киллеров
  10. Естественные киллеры Т-лимфоциты. Взаимодействие естественных киллеров и дендритных клеток
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта