Тест гемолиза в подкисленной сыворотке - методика, показатели нормы
Принцип теста гемолиза в подкисленной сыворотке. Эритроциты больных, страдающих ночной пароксизмальной гемоглобинурией (НПГ) расплавляются в нормально свежей подкисленной сыворотке. Гемолиз происходит за отсутствием специфических антител, при этом способствует процессу расплавления наличие комплемента (С).
Материалы, реагенты для теста гемолиза в подкисленной сыворотке: пробирки на 10/100 мм; штативы; пипетки на 1 и 2 мл; 8,5% раствор NaCl; 0,2 N раствора НС1; раствор ЛКЦД (3 г. декстроза, 2 г. двунатриевого цитрата, 120 мл дистилированной воды); 8,9 г. раствора ЭДТА и 15 г. NaOH в дистилированной воде до 200 мл; 0,01 М раствора NH4OH; эритроциты.
Подлежащие исследованию эритроциты добываются из свежеотобранной крови на ЭДТА или растворе ЛКЦД; можно использовать и эритроциты, сохраненные 2—3 недели в растворе ЛКЦД при +4°С. Трижды промыть в 8,5‰ растворе NaCl и приготовить 50% взвесь, добавлением примерно одинакового количества 8,5‰ раствора NaCl к полученному после центрифугирования осадку. Группу больного определить по системе АВО.
Сыворотка должна быть свежеотобранной у лица в норме и совместимая с больным по системе АВО. Сыворотку можно хранить 1—2 недели при температуре —20°С, однако, до использования не плохо проверить ее по сравнению с уже известными эритроцитами. Инактивация сыворотки достигается путем 30-минутной инкубации при температуре +56°С.
Техника теста гемолиза в подкисленной сыворотке. В 6 пробирок влить реагенты, предусмотренные в таблице.
Системы реакции, применяемые при тесте гемолиза
После 60-минутной инкубации при температуре +37°С в каждую пробирку добавить по 4 мл 8,5‰ раствора NaCl; процентрифугировать и прочитать оптическую плотность надосадочной массы, с помощью спектрофотометра (540 нм).
Расчет, толкование результата теста гемолиза в подкисленной сыворотке. В процентном отношении гемолиз в пробирках 1, 2, 3 расчитать по формуле: % = (ОПи - (ОП5 + ОП4) х 100)/ (ОП6-ОП5),
где: ОПи представляет собой оптическую плотность в чашах 1, 2, 3; остальные значения отражают оптическую плотность в чашах 4, 5, 6.
Когда в чаше 1 отмечается существенное расплавление (более 1%) в то время как в чаше 2 процесс полностью отсутствует — результат рассматривать положительным.
