Определение выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu) - методика, показатели нормы
Принцип определения выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu). При недостатке фолиевой кислоты отмечается блокаж катаболизации гистидина на стадии формиминоглютамовой кислоты, а когда в организм поступает большое количество гистидина, то выделение этой кислоты с мочой значительно увеличивается.
Если в мочу ввести железистосинеродистый нитропруссид произойдет цветная реакция, интенсивность которой (сопоставлением с получаемой раствором FIGlu известной концентрации) делает возможным определение выделенного количества (Johnstone и сотр.).
Материалы определения выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu): раствор 2,5 N соляной кислоты; раствор 0,02 N соляной кислоты; раствор 2,5 N гидроокиси калия; реагент железосинеродистый нитропруссид (приготовить за сутки до использования, растворив в 100 мл дистилированной воды 4 г нитропруссида натрия и 4 г железо-синеродистого калия; сохраняет устойчивость по меньшей мере неделю; профильтровать перед употреблением); тетраборат натрия (насыщенный раствор при комнатной температуре); формимино-1-глютамовая кислота, 0,2% раствор соли (полугидрат бария или иной препарат); хранение раствора при температуре —20°С обеспечивает его устойчивость две недели.
Метод определения выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu). Назначить прием натощак 15 г гистидина, разведенного в 100 мл воды; собрать мочу, выделяемую в интервал от 3 до 5 часов после получения препарата; в мочу добавить 2 мл концентрированной соляной кислоты и хранить до определения, при температуре —20°С.
Техника определения выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu)
Приготовить два набора (один для испытания, другой контрольный) из трех пробирок каждый, именно: одна с подлежащей исследованию мочой, другая со стандартным раствором FIGlu и третья «blanc» с 0,2 N раствором НС1 — по 0,2 мл из каждого раствора. В пробирки с набором для испытания добавить по 0,1 мл 2,5 N раствора НСl, далее (после одночасовой инкубации в баке с водой, при 37°С) по 0,1 мл 2,5 N раствора КОН и 2,0 мл раствора тетрабората натрия, после чего прогомогенизировать массу.
В отношении контрольного набора поступить одинаково, с той лишь разницей, что, в первую очередь, добавляется 2,5 N раствор КОН (разрушающего FIGlu путем гидролиза) и лишь после того 2,5 ,N раствор НС1.
В целях оптического измерения добавить 0,5 мл реагента железистосинеродистый нитропруссид в пробирку «blanc» контрольного набора, прогомогенизировать и вложить в спектрофотометр; спустя 30 сек. (по часам) наладить аппарат на оптическую плотность прочета 0,2 по полосе 485 нм. В таком положении прочитать оптическую плотность пробирки «Ыапс » набора для испытания (также спустя 30 сек. после добавления реагента); далее одинаково работать для прочета пробирок с мочой (контрольных и испытываемых), равно как и со стандартным раствором (контрольным и испытываемым).
Сразу после добавления реагента железосинеродистый интропруссид. любая моча окрашивается с разной интенсивностью, видимо за счет хромогенов, в отличие от окраски обусловливаемой FIGlu, которая появляется относительно медленно (спустя несколько минут).
Далее оставить пробирки в комнатной температуре 60 мин. (в защищенном, от непосредственного солнечного света, месте) и снова измерить оптическую плотность каждой пробирки испытываемого набора,. в сопоставлении с соответствующими пробирками контрольного набора (с отрегулированной оптической плотностью последних до 0,2). В некоторых случаях окраска мочи резкая, что требует отрегулирования оптической плотности до значений выше 0,2.
Расчет выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu)
Значения оптической плотности пробирок с мочой, стандартным раствором и «blanc» набора для испытания получим вычислением полученного результата спустя 30 сек. из результатов, прочитанных спустя 60 мин.
Концентрация формиминоглютамовой кислоты (FJGlu) в моче определяется по формуле:
Метод представляет преимущество простоты и большой точности для клинического диагноза (но недостаточную точность при значениях меньше 50 мкг/мл).
Толкование результатов определения выделения с мочой формиминоглютамовой кислоты (FJGlu). Нормальные значения составляют примерно 100 мкг/мл и меньше. При патологическом состоянии, сопровождающемся фолиевой недостаточностью показатель колеблется от нескольких сот до 3000 мкг/мл. Нередко значения повышаются и при недостаточности витамина В12 (злокачественная анемия) в связи с метаболической взаимосвязью этих двух витамин.
