Действие иммуномодуляторов на активацию дендритных клеток. Созревание дендритных клеток
Важным этапом этих исследований явилось изучение влияния иммуномодуляторов микробного происхождения на процессы созревания ДК, полученных из мононуклеарных лейкоцитов периферической крови (МЛПК) доноров.
Дендритные клетки получали из МЛПК здоровых доноров. В качестве индукторов созревания использовали иммуномодуляторы микробного происхождения — Иммуновак-ВП-4 (25 мкг/мл), ГМДП (10-25 мкг/мл), АСО (0,3 ЕС/мл). Контролем служили ДК, культивируемые в присутствии TNF-a (20 нг/мл).
При инкубировании дендритных клеток, полученных из МЛПК здоровых доноров, в присутствии ИММП отмечали усиление экспрессии костимулирующей молекулы CD80, маркера терминальной дифференцировки CD83 (Иммуновак-ВП-4, ГМДП и TNF-a), молекулы антигенного представления HLA-DR. Молекула CD14 на клетках, стимулированных Иммуновак-ВП-4, ГМДП и TNF-a, экспрессировалась менее активно, чем при действии АСО. Иммуновак-ВП-4 усиливал экспрессию молекулы CD80 в 3,2, 3,8 и 2,6 раза больше, чем TNF-a, ГМДП и АСО, соответственно.
При культивировании дендритных клеток в присутствии АСО процент клеток, экспрессирующих CD83, был невысок — 1,5±0,8, тогда как высокая экспрессия этого маркера отмечалась при культивировании ДК с TNF-a, Иммуновак-ВП-4 и ГМДП. На ДК, стимулированных Иммуновак-ВП-4 и TNF-a, экспрессия молекул CD1a была выше в 1,7 раза и в 1,4 раза соответственно по сравнению с АСО.
Количество клеток, экспрессирующих молекулу антигенного представления HLA-DR, также было больше при использовании Иммуновак-ВП-4 и TNF-a.
Молекула CD14 максимально была представлена на поверхности незрелых клеток, при стимуляции иммуномодуляторами экспрессия ее снижалась, однако при культивировании ДК с АСО число клеток, экспрессирующих антиген CD14 было ниже, чем при действии других иммуномодуляторов, а маркер терминальной дифференцировки ДК в этой культуре практически не определялся, что может свидетельствовать о присутствии в культуре пула макрофагов и незрелых клеток.
Два других иммуномодулятора — Иммуновак-ВП-4 и ГМДП стимулировали созревание ДК в большей степени. Об этом в первую очередь свидетельствуют наличие молекулы CD83 на поверхности ДК и небольшой процент клеток, экспрессирующих маркер CD14, что позволяет предположить при этом формирование определенного пула макрофагов или незрелых ДК. Однако при окраске двойной меткой выявлено, что часть (14,2%) ДК одновременно экспрессируют молекулы CD14 и CD83.
Как известно, маркер CD83 не присутствует на макрофагах и незрелых ДК, следовательно, можно считать, что под воздействием, в частности Иммуновак-ВП-4, формировались зрелые ДК, обладающие химерными молекулярными структурами.
Для зрелых дендритных клеток характерно увеличение экспрессии молекул, участвующих в презентации антигена. Костимулирующая молекула CD80 слабо представлена на незрелых ДК. При добавлении иммуномодуляторов усиливалась экспрессия этого маркера, причем Иммуновак-ВП-4 максимально стимулировал его появление на поверхности клеток по сравнению с остальными иммуномодуляторами, а также с TNF-a.
В процессе созревания дендритных клеток отмечается усиление экспрессии HLA-DR, что дает возможность клетке экспрессировать на поверхности пептиды, полученные при процессинге микроорганизма. Однако на поверхности АПК могут оказаться и собственные белки. В качестве контрольного механизма, предотвращающего развитие аутореактивности, выступают костимулирующие молекулы (CD40, CD80, CD86), экспрессия которых существенно возрастает после взаимодействия именно с бактериальными паттернами.
Дендритные клетки, представляющие на своей поверхности аутореактивные белки, в отсутствии костимулирующих молекул провоцируют анергию аутореактивных клонов Т-клеток. В процессе созревания ДК нет необходимости в дальнейшем поглощении микроорганизмов, что приводит к снижению молекул, опосредующих фагоцитоз: маннозного рецептора, CD14, CD64, CD11b (рецептор к компоненту комплемента).
Таким образом, обработка дендритных клеток, полученных из МЛПК здоровых доноров, иммуномодуляторами бактериального происхождения — Иммуновак-ВП-4 и ГМДП вызывала созревание клеток, при этом происходило увеличение экспрессии костимулирующей молекулы CD80, молекул антигенного представления CD1a, HLA-DR, а также появлялся маркер терминальной дифференцировки CD83 и снижалась экспрессия CD14.
При использовании АСО макрофагальный маркер несколько снижался, но был выше по сравнению с действием других иммуномодуляторов, и при этом усиливалась экспрессия CD80, а маркер терминальной дифференцировки ДК — CD83 практически не экспрессировался, что позволяет сделать вывод о формировании пула макрофагов и незрелых ДК под действием АСО.
