MedUniver Физиология человека
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Эндокринная система
Пищеварительная система
Физиология клеток крови
Обмен веществ. Питание
Выделение.Функции почек
Репродуктивная функция
Сенсорные системы
Физиология иммунной системы
Система кровообращения
Дыхательная система
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Исследование реактивности иммуноглобулинов. Метод спин-меченых гаптенов

Хсиа и Литтл (Hsia, Little, 1973) исследовали взаимодействие двух спин-меченых гаптенов — ДНФ-гидразонового производного N-1-оксил-2,2,5,5-тетраметил-3-пирролидона (I) и М-1-(оксил-2,2,5,5-тетраметил-3-метиламинопирролидинил)2,4-динитробензола (II) с двумя мисломными IgA — МОРС 315 и 460 как методом ЭПР, так и по уменьшению квантового выхода флуоресценции белка.

Обнаружено, что при связывании гаптенов I и II белком МОРС 315 N—О-группы в обоих случаях находятся в сильно иммобилизированном состоянии, но в спектре ЭПР соединения II в отличие от спектра соединения I наблюдаются два типа иммобилизованных компонент. При связывании с белком МОРС 460 свобода вращения N—О-группы соединения I также значительно ограничена, в то время как на вращение N—О-группы соединения II связывание с этим белком влияет мало.

Однако, судя по близкому уменьшению квантового выхода флуоресценции белков при связывании спин-меченых гаптенов и по результатам исследования термодинамики этого процесса, сродство соединений I и II к белкам МОРС 315 и 460 различается незначительно. Следовательно, степень иммобилизации N—О-группы спин-меченого гаптена не во всех случаях характеризует прочность комплекса.

реактивность иммуноглобулинов

По мнению авторов, различия в иммобилизации соединений I и II могут вызываться двумя причинами: 1) лиганды связываются в различных участках конформационно жесткого активного центра, 2) конформация активного центра может стабилизироваться в той или иной степени в зависимости от различий в структуре лигандов.

В другой работе исследовались причины, вызывающие появление двух типов иммобилизованных компонент в спектре ЭПР комплекса II с белком МОРС 315. Было показано, что оно обусловлено двумя энантомерными формами спин-меченого гаптена II. Группа N—О одной из форм лиганда при этом попадает в менее гидрофобное микроокружение, а второй — в более гидрофобное, что обусловливает различное положение иммобилизованных компонент на оси напряженности магнитного поля. Связывание разделенных энантомерных форм (спин-меченых аминов — ДНФ) белком МОРС 315 (приводило к появлению только одного типа компонент.

Метод спин-меченых гаптенов

Замещение спин-меченых гаптенов в активных центрах антител гомологичными гаптена ми было использовано Леутом и сотрудниками (Leute е. а., 1972) для определения концентрации морфина в исследуемом растворе. В этом методе использовался эффект сильного увеличения высоты линий спектра ЭПР спин-меченого морфина при его переходе из иммобилизованного состояния в свободное в результате вытеснения из активного центра. Высота узких линий расторможенного спектра ЭПР характеризует в данном случае концентрацию морфина в исследуемом растворе.

Нижний предел чувствительности такого метода—10 7М морфина (0,03 мкг/мл). В дальнейшем этот подход получил развитие (Montgomery е. а., 1975) и был применен для определения концентрации ряда лекарственных веществ в сыворотке. Он оказался в 100 (раз чувствительнее обычного химического метода и обладал высокой специфичностью. Для одного определения достаточно 50 мкл сыворотки.

Хсиа и сотрудники использовали комплекс ДНФ — метилен (N-1-оксил-2,2,5,5,-тетраметил-3-метил, аминопирролидинил-2,4-динитробензол) с миеломным иммуноглобулином А (МОРС 315) как модельную систему для исследования перекрестной активности этого белка по отношению к ДПФ и его аналогам. О количестве свободного, вытесненного из активных центров спин-меченого гаптена судили по интенсивности высокополыюй компоненты спектра ЭПР. Количественные оценки, полученные этим методом, находятся в хорошем соответствии с результатами равновесного диализа. Предложенный метод является весьма перспективным в иммунохимических исследованиях.
На основании полученных данных можно сделать следующие выводы о строении активного центра антител.

- Читать далее "Изменчивость активных центров антител. Электронная микроскопия иммуноглобулинов"


Оглавление темы "Иммуноглобулины и особенности их строения":
1. Классы иммуноглобулинов. Структура цепей иммуноглобулинов
2. Легкие цепи иммуноглобулинов. Организация иммуноглобулинов
3. Вторичная и третичная структура иммуноглобулинов. Изучение структуры иммуноглобулинов
4. Электронный парамагнитный резонанс иммуноглобулинов. Структура IgG (иммуноглобулина G)
5. Строение иммуноглобулина G. Домены IgG
6. Центр иммуноглобулина G. Активный центр IgG
7. Строение активных центров антител. Изучение активных центров иммуноглобулинов
8. Свойства активных центров антител. Реактивность иммуноглобулинов
9. Исследование реактивности иммуноглобулинов. Метод спин-меченых гаптенов
10. Изменчивость активных центров антител. Электронная микроскопия иммуноглобулинов
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта