Гистогенетическая диагностика опухолей. Анализ ДНК опухоли.
Большие перспективы в диагностике рака, по-видимому, имеет количественная оценка ДНК в опухолевых клетках, основанная на автоматическом подсчете клеточной популяции по степени плотности составляющих ее элементов. В опухолях количество полиплоидных клеток значительно возрастает, о чем говорилось выше. Приборы, основанные на проточной цитометрии, анализирующие один или одновременно несколько параметров в каждой одиночной клетке, дают полное представление о популяции в целом. Кроме количества ДНК, этими параметрами могут быть различные показатели. В частности, могут быть использованы количественные гистохимические и иммукогистохнмические методы выявления в качестве маркеров опухолевых клеток различные ферменты — кислая и щелочная фосфатаза, катепсии В, неспецнфнческая эстераза, глюкуронидаза, глютамнлтрансфераза и др., активность которых в ряде новообразований изменяется.
Наряду с относительно стабильными гистохимическими свойствами, которые лежат в основе идентификации разработанных выше признаков опухолей, связанных с их гистогенетической диагностикой, в опухолевых клетках встречаются также гистохимические изменения, обусловленные их прогрессией Например, оказалось, что колебания некоторых гистохимических показателей в опухолевых клетках коррелируют с клиническим течением н, главным образом, с прогнозом заболевания. В частности, так обстоит дело при остром лейкозе у детей, при котором степень активности фермента пентозного цикла — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы — находится в прямой связи с клиническим развитием болезни и является прогностическим тестом при определении дальнейшего течения острого лейкоза у детей. Выявление в период обострения в мазках костного мозга больных детей 50—80% властных клеток с низкой или отрицательной активностью глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы указывает на плохой прогноз и возможность быстрого летального исхода Обнаружение же в пунктате более 50—80% бластных клеток с высокой активностью этого фермента говорит о возможности длительной ремиссии.
Описанные гистохимические свойства той или иной опухоли могут значи тельно колебаться, что необходимо учитывать при использовании данных мето дов в диагностике. Эти колебания обусловлены главным образом степенью и типом дифференцировки опухолевых клеток, адаптацией их к условиям существования, особенностями васкуляризации, прогрессии опухолей.
В заключение необходимо напомнить, что для проведения большинства гистохимических реакции, особенно связанных с выявлением ферментов, необходимо иметь свежий материал или использовать специальные методы фиксации. Это в определенной степени может ограничивать использование гистохимии в практической работе патологоанатомов.
Гистохимические признаки различных опухолей человека были суммированы Цугибе.
В предыдущих статьях было показано, что опухолевые клетки на ультраструктурном и гистохимическом уровне сохраняют способность к специфической диффереицировке в пределах, свойственных тем камбиальным элементам, которые послужили источником их возникновения. Именно эта способность опухолевых клеток определяет формирование гетерогенности их популяции в новообразованиях и лежит в основе развития важнейших свойств опухолевых клеток, которые могут быть с успехом использованы в диагностике, определении гистогенеза, прогноза, при выборе оптимальных способов лечения, создании специализированных классификаций опухолей и при решения других онкологических вопросов.
Имеющаяся информация об иммунологических и иммуногистохимических свойствах опухолевых клеток также позволяет прийти к выводу, что в них сохраняются оргаио-, ткане- и цитоепецифические антигенные особенности, позволяющие достаточно широко использовать в диагностике опухолей человека иммуногистохимию.
Особенно большие перспективы открылись в связи с созданием методов получения моноклональных антител с помощью гибридов. Моиоклональные антитела позволяют обнаруживать самые незначительные антигенные различия между клетками (в одну детерминанту) и давать их количественную оценку. Они обладают абсолютной спеиифичностью и стандартностью, могут быть получены в больших количествах и в любое время, так как продуцирующие их клеточные линии можно законсервировать на неопределенно долгий срок. С помощью обычных антисывороток, полученных путем иммунизации и очистки сыворотки, никогда нельзя достигнуть такой специфичности, чувствительности и стандартизации, какую имеют моиоклональные антитела. Уровень и точность иммунодиагностических исследований зависят от того, в какой мере в них используются моиоклональные антитела.
Выявляемые иммуногистохимическими методами антигены опухолевых клеток могут быть разделены на 4 группы антигены промежуточных и миогенных волокон, так называемые диффереицировочные антигены клеточной мембраны, секретируемые антигены, антигены экспрессии онкогенов.