Определение щелочноустойчивого гемоглобина - методика
Представляет собой характерное исследование в целях выявления гемоглобина Ф. За исключением последнего все нормальные и патологические гемоглобины денатурируются в резко щелочной среде.
Необходимые материалы и реагенты для определения щелочноустойчивого гемоглобина: раствор гемоглобина, приготовленный посредством расплавления клеток, как было ранее описано; N/12 раствора NaOH; полунасыщенный раствор сернокислого аммония (приготовляется из насыщенного раствора путем разведения, в одинаковых объемах, с дистилированной водой, и дальнейшим добавлением 1,5 мл концентрированной НС1 на 1000 мл раствора); микропипетки на 0,1 и 0,02 мл, филтровальная бумага, лейки, хронометр.
Патологический гемоглобин при серповидноклеточной анемии
Метод определения щелочноустойчивого гемоглобина. В пробирку для гемолиза влить 1,6 мл N/12 раствора NaOH. Микропипеткой добавить 0,1 мл раствора гемоглобина. Через минуту добавить Зт 4 мл раствора сернокислого аммония. Отфильтровать. Пометить пробирку буквой А.
В другую пробирку влить 4 мл дистилированной воды, а поверх нее 0,02 мл раствора гемоглобина. Пробирку пометить буквой Б.
Прочитать экстинкцию проб А и Б по сравнению с дистилированной водой, при длине волны 540 нм и толщине слоя в баке 10 мм. Для прочета результата фотометр снабжается фильтром S 53. Концентрацию щелочноустойчивого гемоглобина (гемоглобина Ф) определять по следующей формуле: щелочноустойчивый Гб%=(экстинкция раствора А/экстинкция раствора Б) х 0,25 х 100.
Значения щелочноустойчивого гемоглобина, определенные по образцам крови от лиц в норме, составляют примерно 1%. Завышенные значения встречаются при: гомо- и гетерозиготной талассемии, наследственной персистентности гемоглобина Ф, прочих гемоглобинопатиях, сопровождающих аномальный гемоглобин, равно как и при беременности, различных злокачественных заболеванниях крови, бирмеровской анемии, устойчивой анемии и пр.