Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе - методика, показатели нормы
Электрофорез на уксуснокислой целлюлозе составляет быстрый и чувствительный метод. Отделяет как физиологические, так и патологические фракции, даже если они находятся в очень малой концентрации.
Материал для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе: буфер трис-ЭДТА-борная кислота [трис (гидроксиметиламинометан) 14,50; 1,50 г ЭДТА (келатон 2); 0,90 г. борной кислоты; до 1000 мл дистилированной воды; 2% раствор цианида натрия; ленты уксуснокислой целлюлозы (сепрафор III, целаграмм, целлогель и пр.)].
Методы для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе
Ленты ацетата погрузить в буфер, затем протампонировать между двумя кусками фильтровальной бумаги и растянуть на опорную пластинку аппарата для электрофореза. Рама погружается в ванну для электрофореза. Для лучшего соединения с буфером на края лент ацетата наложить полоску фильтровальной бумаги Ватмана.
Спустя 10 минут после погружения в ванну с помощью капиллярной трубки нанести на отрицательный полюс каждой ленты образец гемоглобина, в виде очень узенькой полоски. Когда ленты широкие, можно нанести несколько образцов. Гемоглобин наносится в виде цианметгемоглобина (5—6 капель раствора гемоглобина на 1 каплю цианида). Подвергнуть двухчасовой миграции, при напряжении 200 в и ампераже 0,5 ма/см.
При таких условиях работы возможно отделить нормальные фракции гемоглобин — А1 и А2, равно как и все патологические фракции гемоглобина, иной электрической зарядки, чем нормальный гемоглобин.
Элюцию фракций проводить, без окраски, в буфере трис. Что касается гемоглобина А2 и контрольного препарата элюцию делать в 3 мл буфера, в то время как для гемоглобина А1 использовать 15 мл буфера. В отношение патологи-гических фракций объем вещества для элюции определить в зависимости от количества аномального гемоглобина.
Через 30 мин. после элюции, прочитать результат, с помощью Спеколя или спектрофотометра, при длине волны 415 нм. При расчете учитывать объемы, использованные для элюции, в том смысле что полученный, в отношение гемоглобина А1 результат следует помножить на 5.
Сумма экстинкций, составляющая 100%, экстинкция каждой фракции деленная на общую экстинкцию, дает, в процентном отношении, значение соответствующей фракции. По этому методу нормальные значения для гемоглобина А2 колеблятся между 1,5—2,5%.
Если по какой-либо частной причине ленты следует окрасить то, после промывания, на лентах помимо нормальной и патологических фракций появляются две белковые негемоглобинные фракции, располагающиеся позади гамоглобина А2, представляющие собой угольные ангидразы b и c.
