Отбор, приготовление и хранение проб крови при гемоглобинопатиях
Методы, применяемые при диагностировании гемоглобинопатии преследуют, с одной стороны, количественное определение нормального гемоглобина А, А2, Ф — что весьма важно для постановки диагноза таллассемического синдрома, а с другой — выявление возможного наличия аномальных гемоглобин.
Структурные сдвиги в аномальных гемоглсбинах выражаются изменением физико-химических и физиологических свойств по сравнению с нормальным гемоглобином, что, в частности, выражается изменением электрической зарядки, растворимости, молекулярной устойчивости, спектра поглощения, сродства к кислороду, тенденции к окислению.
В соответствии с этими измененными свойствами были разработаны и проведены в жизнь методы, нацеленные на одно или несколько из этих свойств, делающие возможным выявление аномалии гемоглобина. По этим методам исследование проводится на эритроцитах или растворе гемоглобина, получаемого от расплавления данных клеток.
Отбор крови делать на противосвертывающем веществе, преимущественно на 3,8% растворе лимоннокислого натрия из расчета 2 мл противосвертывающего вещества на 8 мл крови. Обработку можно провести непосредственно или сохранить материал в холодильнике, в течение 1—3 дней, что не влияет на результат исследования. Рекомендуется хранить в присутствии плазмы.
Процентрифугировать кровь, удалить плазму, трижды промыть эритроциты солевым изотоническим раствором, с таким расчетом, чтобы отношение между объемом солевого раствора и клетками равнялся 4/1. Расплавление осуществляется с помощью дистилированной воды, в следующих условиях: на один объем промытых гематий, один объем дистилированной воды; взболтать, затем добавить объема хлороформа. Снова энергично взболтать и проценттрифугировать 15 мин. при 3000 об./мин.
После того раствор гемоглобина перелить в пробирку, которую можно сохранить в холодильнике 2—3 недели, при температуре + 4°С. В рефрижераторе препарат сохраняется даже несколько лет.
Приготовленный таким образом раствор гемоглобина применяется для: электрофореза гемоглобина, определения щелочно-устойчивого гемоглобина, хроматографирования. В отдельных случаях тот же гемолизат может послужить для фингерпринта pi исследования аминокислот.
Для лабораторного исследования, в котором используются кровяные клетки, условия отбора одинаковы.
Лабораторные исследования гемоглобина делятся на две группы:
а) текущие исследования для диагностических целей и
б) специальные исследования, предназначенные определению структуры данного гемоглобина.
Первая группа исследований способствует постановке диагноза талласемических синдромов, а из категории структурных гемоглобинопатии — гемоглобиноза S. В отношение всех остальных структурных гемоглобинопатии это исследование приводит лишь к общей формулировке гемоглобинопатии, с аномальным гемоглобином. Определение вида аномального гемоглобина требует специальных исследовандй, которые превышают возможности большинства лабораторий.
