Косвенная реакция Кумбса проводится для выявления в сыворотке неизвестного антитела или наличия на поверхности эритроцита (напр. Du) невыявимого иным способом антигена.
Использованные, в качестве «суппорта», эритроциты в виду сенсибилизации, с возможными антителами исследуемой сыворотки принадлежат к группе 0. Предварительно их следует трижды промыть физиологическим раствором. К одному объему промытых эритроцитов добавить 2—3 объема исследуемой сыворотки. Смесь влить в пробирку для гемолиза и подвергнуть процессу 90-минутной инкубации при температуре 37°С.
Сенсибилизированные эритроциты трижды промыть физиологическим раствором, после третьего промывания удалить надосадочную массу. Приготовить 50% взвесь эритроцитов в физиологическом растворе, нанести на пластинку и сверху налить антиглобулиновую сыворотку. Появление агглютинации означает, что в исследуемой сыворотке имеется неполное антитело, адсорбированное на эритроцитах и не устраненное 3 последовательными промываниями.
Когда сыворотка известна (напр. содержит неполные антитела анти-D) то образец исследуемых эритроцитов содержит слабый антиген D (Da), который не удалось выявить путем непосредственного контакта клеток и стандартной сыворотки анти-D. Когда же сыворотка не известна, применять эритроциты 0 и Rho (D) положительные, которые выявляют, в исследуемой-сыворотке, наличие антител анти-D.
Положительная реакция и с эритроцитами 0 Rho (D) отрицательными свидетельствует о том, что обнаруженные в исследуемой сыворотке антитела иной специфичности, чем анти-D.
Видео методика проведения непрямой пробы Кумбса (на примере ID diacell 1-2-3 Bio-Rad)
