Методика определения резус фактора эритроцитов крови - Rho D
В порядке трансфузионной значимости непосредственно после системы 0АВ следует резус фактор D резус-системы. Несовместимое по этому фактору переливание в 50% случаев сопровождается анти-D иммунизацией у тех лиц, в анамнезе которых не значатся переливания крови; но такое переливание может привести и к осложнениям, таким как острый внутрисосудистый гемолиз у «получателей лод угрозой» (в анамнезе которых отмечены переливания крови или беременность) .
Кровь, подлежащая исследованию, отбирается в стеклянные пробирки, без противосвертывающего вещества. Реакция происходит, в обязательном порядке, на пластинке с ковшиками или на предметном стекле во влажной камере (чашке Петри).
Нанести каплю сыворотки анти-Rho (D), сверху добавить в 10 раз меньшее количество эритроцитов, отобранных пастеровской пипеткой из гематий, отделившихся от сгустка, который находится на дне пробирки.
Прогомегонизировать смесь одним из углов предметного стекла, затем пластинку с ковшиками или накрытую чашку Петри заложить в термостат на один час, при температуре 37°С.
Агглютинация охватывает эритроциты Rho (D) положительные, в то время как резус-отрицательные не подвергаются этому процессу. Для устранения возможной погрешности работать одновременно с двумя образцами контрольных эритроцитов (положительных и отрицательных).
В целях выявления слабого фактора D (так называемого «Du») трижды промыть эритроциты физиологическим раствором и добавить на 1 объем эритроцитов 3 о ъема анти-Rho (D) сыворотки неполного вида. Смесь продержать 90 мин. во влажной камере, при температуре 37°С. Сенсибилизированные таким образом эритроциты трижды промыть физплогичееким раствором.
После последнего промывания приготовить 50% взвесь эритроцитов в физиологическом растворе и поставить в контакт с антиглобулиновой сывороткой на предметном стекле. Прогомогенизировать и прочитать результат спустя 3—5 мин. макроскопическим или, предпочтительно, микроскопическим путем. Обнаружение реакции агглютинации свидетельствует о том, что данное лицо Du положительное.
Способ одновременной обработки папаином применяется для выявления некоторых «тепловых» антител, неполного типа, равно как и для быстрого определения фактора Rho (D).
На пластинку с ковшиками нанести последовательно: 1) каплю 1% раствора папаина с цистеином, в физиологическом растворе; 2) каплю исследуемой сыворотки или анти-Rho (D) сыворотки неполного типа; 3) каплю 5% взвеси эритроцитов в 9°/00 растворе хлорида натрия.
Прогомогенизировать смесь углом предметного стекла, накрыть другой пластинксй с ковшиками и вложить на 15 мин. в термостат, при температуре 37°С.
Агглютинация свидетельствует о присутствии в сыворотке антител неполного типа или положительного фактора Rho (D). Отсутствие агглютинации говорит о лишенной неполных антител сыворотке или о наличии отрицательного фактора Rho (D). В случае несоблюдения указаний по использованию лиофилизированного папаина с цистеином возможны погрешности за счет ложноположительных или ложноотрицательных реакций.