Посев испражнений, гноя детей. Оценка чувствительности микробов к антибиотикам
Если нет особых указаний врача, в большинстве лабораторий Северной Америки испражнения исследуют на Salmonella spp., Shigella spp. и Campylobacter spp. Применяются селективные агаровые среды, подавляющие рост нормальной микрофлоры толстой кишки, и дифференциальные агаровые среды, позволяющие отличить патогенные энтеробактерии от нормальной микрофлоры. Наилучшие результаты получают при посеве свежих испражнений, но можно использовать и посев мазков из прямой кишки. Если необходим посев на Escherichia coli 0157:H7, Vibrio cholerae, Yersinia enterocolitica, Aeromonasspp. или Plesiomonas spp., это обязательно указывают в бланке направления.
Исследование на энтеротоксигенные штаммы Escherichia coli — самую частую причину диареи путешественников — и другие патогенные штаммы Escherichia coli, за исключением 0157:Н7, обычно не проводится. Если с момента госпитализации прошло более 3 сут, посев испражнений редко имеет диагностическое значение. Посев на Clostridium difficile (наиболее частого возбудителя внутрибольничной диареи) в значительной мере вытеснен исследованиями на образование токсина в постановке цитотоксического теста на культуре клеток и в ИФА.
Гной из абсцессов, раневое отделяемое, плевральная, перитонеальная, синовиальная и другие жидкости высеваются на обычный агар либо мясной бульон. По возможности в лабораторию надо отправлять именно жидкость, а не мазки, поскольку чем больше объем материала, тем легче обнаружить в нем микроорганизмы, находящиеся в низкой концентрации. Посев синовиальной жидкости (при гнойном артрите) чаще приносит положительные результаты, если жидкость вводят в емкости с бульоном, предназначенные для посевов крови. В абсцессах брюшной полости и гнойных ранах часто обнаруживаются анаэробные микроорганизмы.
Материал в таких случаях необходимо правильно собрать и быстро доставить в лабораторию в анаэробных условиях, лучше всего в специальных анаэробных контейнерах.
Проба на чувствительность к антимикробным средствам
Этому исследованию подвергаются практически все патогенные микроорганизмы. Исключения редки (например, все стрептококки группы А чувствительны к пенициллину, поэтому их чувствительность к антимикробным средствам не проверяют). Чаще всего используют метод диффузии в агаре в модификации Кирби-Бауэра: стандартизованный посевной материал вносят в чашку с агаром, а затем на агар помещают пропитанные антимикробными средствами диски из фильтровальной бумаги. После инкубации в течение 18-24 ч измеряют зону задержки роста микроорганизмов вокруг каждого диска и сравнивают полученные данные с национальными стандартами чувствительности и резистентности.
Другой широко применяющийся метод — этот метод последовательных разведений: стандартное число микроорганизмов вносят в питательные среды, содержащие уменьшающуюся концентрацию антимикробного препарата. Затем рассчитывают минимальную концентрацию препарата, подавляющую рост микроорганизмов, — МПК. Meтод последовательных разведений также позволяют узнать минимальную бактерицидную концентрацию — МБК. Иногда МБК определяют, чтобы исключить толерантность бактерий (МБК более чем в 4 раза превышает МПК).
В настоящее время получил широкое распространение автоматизированный вариант метода последовательных разведений, в котором используются планшеты с лунками объемом в несколько микролитров со стандартами растворами антибиотиков. Однако к данным МПК, полученным с помощью автоматизированных систем, надо относиться с осторожностью из-за возможной резистентности бактерий (например некоторые штаммы пневмококков резистентные к пенициллину, энтерококков — к низким концентрациям ванкомицина). Для быстрого определения чувствительности рекомендуется метод диффузии в агаре, например, тест с оксациллиновым дисками, позволяющий определить пневмококки, резистентные к пенициллину. Полученный результат необходимо подтвердить другими методами. Новый метод измерения МПК — Е-тест. Он основан на диффузии в агаре, только вместо дисков используют градуированные бумажные полоски, на которой создан градиент концентрации антибиотика.
Зона подавления роста в этом случае имеет овальную форму. Значение МПК считывают в месте пересечения этой зоны с полоской. Преимущества Е-теста включают надежность, воспроизводимость эффективность по отношению к микроорганизмам, которые требуют специальных сред или условий роста. Однако использованию Е-теста в качестве основного метода препятствует его высокая стоимость.
Микробиологические исследования в амбулаторных учреждениях. Во многих из таких учреждений у больных фарингитом определяют наличие антигенов стрептококков группы А. Однако все отрицательные результаты исследования на антигены стрептококков группы А необходимо подтверждать посевом.
В амбулаторных учреждениях, которые получили сертификат соответствия Рекомендациями по усовершенствованию лабораторной службы США, также может проводиться микроскопия негативных мазков, в том числе с добавлением гидроксида калия, исследование на яйца остриц, подсчет количества лейкоцитов в кале и общий анализ мочи. Такие лаборатории не могут заниматься другими исследованиями, но зато освобождены от периодических проверок и квалификационных экзаменов. Окраска по Граму и выделение культуры бактерий, согласно Рекомендациям по усовершенствованию лабораторной службы США, относятся к группе исследований средней и высокой степени сложности. Любая лаборатория, выполняющая указанные исследования, должна соответствовать всем тем требованиям, что и микробиологическая лаборатория в стационаре. Кроме того, она должна следить за контролем качества, а работающие в ней специалисты — подвергаться квалификационным экзаменам.