Разновидности субъединичных вакцин. Успехи в разработке субъединичных вакцин.
Вакцина, содержащая мембранный гликопротеин вируса Эпштейна-Барр (gp-340) и мурамилдипептид, вызывала у обезьян индукцию антител к gp-340 определяемых в ИФА и в реакции нейтрализации. У иммунизированных животных, зараженных 100%-ной канцерогенной дозой вируса, отмечали резкое снижение количества мононуклеарных инфицированных клеток и отсутствие опухолей.
Экспериментальную вакцину против болезни Ауески готовили из мембран инфицированных клеток РК-15. Клетки собирали через 16 ч после инфицирования до развития выраженного ЦПЭ (3х107 в 1 мл). Эффективность субъединичной и инактивированной цельновирионной вакцины сравнивали на свиньях. У свиней, привитых дважды субъединичной вакциной, гуморальный, клеточный и протективный иммунитет были более выраженными, чем у привитых инактивированной вакциной. Эти результаты позволили разработать промышленную технологию изготовления вакцины и наладить ее производство. Основные этапы этого процесса выглядят следующим образом. Делеционный штамм КаН вируса БА размножали в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в ферментерах объемом 100—2800 л и инактивировали этиленимином. Осветленную очищенную и концентрированную ультрафильтрацией вируссодержащую суспензию с целью разрушения вирионов и освобождения гликопротеинов обрабатывали полиоксиэтиленовым спиртом, а гликопротеины осаждали ультрацентрифугированием.
Суспензию очищенных вирусных гликопротеинов (10 мг/доза) эмульгировали в минеральном масле. Отсутствие в вакцинном штамме КаН gpl, gp63, так же как и удаление капсидных белков в процессе приготовления субъединичной вакцины, существенно не отражалось на ее иммуногенности по сравнению с цельновирионными препаратами. Однако, в отличие от них, субъединичная вакцина давала возможность по антителам различать вакцинированных и инфицированных животных.
Субъединичную вакцину против герпесвирусной инфекции КРС готовили из вирулентного вируса типа 4. Телята, иммунизированные внутримышечно дважды ИСКОМ-вакциной (50 и 100 мкг вирусных антигенов), имели высокий титр ВНА (1:3500) и не заболели при контрольном заражении.
Гликопротеины вируса инфекционного ларинготрахеита кур выделяли из экстрактов вирусинфицированных клеток и очищали с помощью лектин-аффинной хроматографии. Препаратами, содержащими вирусные гликопротеины (205, 160, 115, 90, 85, 74, 60 и 50 кД), вакцинировали цыплят. Гликопротеины предохраняли 83% птицы от инфицирования патогенным вирусом, о чем также свидетельствовало отсутствие вирусного антигена в трахее инфицированных цыплят. Формирование вируснейтрализующих антител не коррелировало с напряженностью иммунитета у вакцинированной птицы.
ИСКОМ герпесвируса лошадей тип 1 содержал все основные гликопротеины в соотношениях, аналогичных их содержанию в интактном неразрушенном вирусе. Иммунизация вызывала у хомяков антительный ответ к индивидуальным вирусным гликопротеинам и полипептидам. Хомяки, вакцинированные двукратно с интервалом 6 недель, были полностью защищены от заражения 100 ЛД50 герпесвируса-1 лошадей.
Определенные успехи достигнуты в создании субъединичных вакцин против парамиксовирусных инфекций человека и животных. ИСКОМ, приготовленный на основе мембранных Н- и F-белков, вируса кори, выделенного из лизатов инфицированных клеток Vera, вызывал образование нейтрализующих и протективных антител, специфичных к Н-и F-антигенам у мышей, крыс, кроликов, обезьян и собак. ИСКОМ, содержащий лишь F-антиген, не вызывал у животных формирования нейтрализующих антител и антигемагглютининов, но индуцировал антитела, идентифицируемые в ИФА тестами ингибирования гемадсорбции F-антигенами либо вызываемого им сплавления. Оба комплекса вызывали Т-клеточный ответ и защиту мышей от летального интрацеребрального заражения вирусом кори. Для развития полноценного иммунитета против кори вакцина должна содержать обе субъединицы вируса.
ИСКОМ, содержащий F- и Н-антигены вируса чумы плотоядных, вызывал у привитых собак образование вируснейтрализующих антител и развитие иммунитета. Этот препарат также защищал тюленей от патогенного для них морбилливируса. ИСКОМ, содержащий белки F- и Н-вируса кори, создавал частичную защиту у собак к вирусу чумы плотоядных. В этом отношении живая коревая вакцина была более эффективной.
Гликопротеиновый гемагглютинин-нейраминидазный комплекс вируса ньюкаслской болезни (штамм Ла-Сота) обнаружил выраженную антигенную активностью при испытании на курах.
Смесь гликопротеинов F; G и матриксного белка М респираторно-синцитиального вируса использовали для иммунизации мышей. Иммунитет проверяли интраназальным заражением мышей вирулентным штаммом вируса. Вакцину, содержащую различное количество вирусного антигена, вводили подкожно с полным адъювантом Фрейнда 1—3 раза. В дозе 5 мкг вакцина не защищала мышей, тогда как в дозе 25 мкг у 93% зараженных мышей не отмечено легочных поражений, хотя у них после вакцинации не обнаружено вируснейтрализующих антител. Выявлялись только антитела к F-, G- и М-белкам в других реакциях. Вируснейтрализующие антитела появлялись только у мышей, вакцинированных двукратно в дозе 50 мкг каждого компонента. При этом все животные были полностью резистентны к заражению. Защитным эффектом обладали антитела к белкам F и G, но не к М-белку. Субъединичную вакцину против РС-инфекции готовили из концентрированного вируса, разрушенного мягкими детергентами. Белки F, G и М очищали сорбцией на ионообменнике с последующей элюцией. Полученный препарат обладал выраженной иммуногенностью.
Экспериментальные иммуностимулирующие комплексы, содержащие субъединицы оболочки вируса краснухи, были испытаны на кроликах. Оказалось, что такая вакцина по антигенности и индукции нейтрализующих антител и антигемагглютининов, не отличается от живой вакцины. Она вызывала защитный иммунитет у обезьян даже в присутствии пассивных антител.
Гликопротеины пепломеров коронавируса гепатита мышей в дозе 1 мкг с адъювантом Фрейнда защищали мышей от развития летального энцефалита при заражении (10 ЛД50) гомологичным вирусом.