Многолетний опыт пренатальной диагностики позволил нам разработать алгоритм и предложить оптимальную схему инвазивной пренатальной диагностики. В основу алгоритма были заложены определенные условия работы.
1. Использование ранее разработанных нами методов приготовления препаратов ускоренным «прямым» способом, которые в сочетании с дифференциальной окраской хромосом позволяют проводить детальный анализ кариотипа плода уже через 3—4 часа после получения плодного материала.
2. Применение компьютерной отечественной установки для кариотипирования «Видео-Тест» в целях ускорения и повышения качества кариотипирования (стандартный вариант кариотипа, приготовленного таким методом, приведен на рисунке.
3. Низкая частота осложнений после инвазивных вмешательств с целью получения плодного материала.
4. Сочетанная диагностика на одном образце генных и хромосомных болезней у плода.
Согласно нашему алгоритму, работа осуществляется в несколько последовательных этапов. Цитогенетический анализ, как правило, начинается с анализа дифференциально окрашенных хромосом на прямых препаратах из хориона или плаценты. При нормальном кариотипе у плода рекомендуется продолжение беременности. При недостаточной митотической активности в клетках цитотрофобласта через несколько дней следует провести повторную аспирацию ворсин хориона. В случае однотипной хромосомной патологии во всех проанализированных метафазных пластинках рекомендуется прерывание беременности, При наличии в биоптате хориона или плаценты маркерных хромосом или хромосомного мозаицизма обязательно проводится кариотипирование родителей и предлагается проведение кордоцен-теза для уточнения кариотипа плода. По результатам кордоцентеза рекомендуется продолжение беременности, а в случае подтверждения патологии - ее прерывание.
При проведении пренатальной диагностики в связи с высоким риском моногенной патологии после исключения основного диагноза, по нашему мнению, целесообразно проведение анализа кариотипа, поскольку сочетание высокого риска генной болезни и патологии кариотипа у одного плода в клинической практике встречается достаточно часто.
Верификация диагноза хромосомных болезней
Важным этапом пренатальной диагностики является верификация цитогенетического диагноза, включающая исследование влияния аномального хромосомного набора на развитие плода. Учитывая отсутствие общепринятой схемы комплексного исследования плодов с хромосомными аберрациями, эмбриологические и цитогенетические особенности хориона, а также опыт, накопленный при исследовании сложных случаев, мы разработали схему верификации пренаталъного диагноза. Схема предусматривает активное участие в этой работе врача ультразвуковой диагностики, врача-генетика, патоморфолога, цитоге-нетика и молекулярного биолога.
После установления хромосомного дисбаланса пациентке рекомендуется детальное ультразвуковое исследование высокого уровня. Повторная эхография при установленном цитогенетическом диагнозе позволяет выявить аномалии развития плода, не отмеченные при первичном осмотре.
После прерывания беременности в I триместре проводится цигогенетический анализ хромосомных препаратов из тканей и органов абортусов с использованием традиционных гштогенетических методов, а также методов гибридизации in situ (FISH-методы) и молекулярных методов. Уже на этом этапе весьма желателен патоморфологический анализ материала абортуса.
После искусственного прерывания беременности во II триместре возможности цитогенетической диагностики ограничены вследствие мацерации большинства тканей плода. Лаборатории, где хорошо налажены методы культивирования тканей, вполне могут применить эти методы для верификации кариотипа плода. Обязательным является детальный патоморфологический анализ в соответствии с протоколом исследования случаев антенатальной гибели плода.
