MedUniver Акушерство
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Акушерство:
История акушерства
Женские половые органы
Физиология беременности
Диагностика беременности
Развитие эмбриона
Неонатология
Кормление грудью
Характеристика родов
Роды на видео онлайн
Акушерская патология
Пренатальная диагностика
Врожденные болезни
Бесплатно книги по акушерству
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Основные принципы цитогенетической пренатальной диагностики.

В настоящее время проблема цитогенетической диагностики при любом сроке беременности практически решена. Разработаны надежные и эффективные методы хромосомного анализа клеток плода и зародышевых оболочек. В зависимости от срока беременности и задач исследования материалом для хромосомного анализа могут служить клетки АЖ, хориона, плаценты и лимфоциты пуповинной крови плода, полученные тем или иным инвазинным способом. В нашем центре наиболее часто используются клетки хориона (I триместр) или клетки плаценты (II триместр), полученные с помощью трансабдоминальной хорионбиопсии или плацентоцентеза. Хромосомные препараты из тканей хориона или плаценты готовят прямым или непрямым методами, детально рассмотренными ранее в методических рекомендациях и соответствующем руководстве.

Преимущества и недостатки цитогенетического анализа при использовании разных методов получения хромосомных препаратов из образцов плодного материала представлены в табл.

Использование в большинстве центров комплекса цитогенетических и молекулярно-цитогенетических методов диагностики позволяет получить наиболее полную информацию о кариотипе плода на разных стадиях внутриутробного развития.

При пренатальном кариотипировании следует руководствоваться принципами анализа препаратов хромосом, принятыми в международной клинической цитогенетике и утвержденными Министерством здравоохранения РФ, а также правилами международной номенклатуры описания карнотита.

Особенности цитогенетического анализа клеток различного плодного происхождения Клетки амниотической жидкости Клетки АЖ представлены несколькими типами различного происхождения:
— клетки амниотической оболочки (собственно амниоциты),
- эпителиальные клетки плода (эпидермиса, пищеварительного тракта, мочеполовых и дыхательных путей, слизистой оболочки ротовой полости).

Характеристика методов получения цитогенетических препаратов для кариотипирования плода
цитогенетические препараты

Количественный и качественный состав клеток АЖ, а также концентрация жизнеспособных клеток имеют индивидуальную вариабельность и зависят от стадии развития. Оптимальным для цитогенетических исследований является амниотический эпителий — активно пролиферирующий клон клеток, специфический для данной культуры. Между тем точная идентификация типов клеток, способных к митотическим делениям и клонообразованию в условиях клеточных культур in vitro, весьма затруднена.

Наиболее часто для культивирования используют амниотические клетки, полученные в срок 15—18 нед беременности. Использование для этих целей амниоцитов более ранних (12-14 нед беременности) или более поздних (после 20 нед беременности) сроков принципиально возможно, но, как правило, резко осложняет и удлиняет процесс диагностики, увеличивает число неудачных попыток.

Стандартное культивирование клеток АЖ включает следующие этапы: постановку культуры, субкультивирование, гипотоническую обработку и фиксацию. Несмотря на широкое использование культур клеток АЖ в мировой практике, единой методики для получения из них хромосомных препаратов не существует. Для культивирования клеток АЖ используют два основных подхода, различающихся по способу получения колоний и методам фиксации.

1. Flask-метод-культивирование клеток во флаконах и фиксация суспензии монослойной культуры после трипсинизации. Анализ проводят в двух из трех культур (по 10 метафаз для каждого образца). Если во всех метафазных пластинках наблюдается одинаковый кариотип, диагноз считается установленным. В случае обнаружения единичной метафазы с аберрантным кариотипом (числовым или структурным), анализируется резервная третья культура. Если одна и та же хромосомная аберрация определяется более, чем в одной метафазе из одного флакона, но не подтверждается в остальных флаконах, ставится диагноз «псевдомозаицизм». В случае обнаружения одной и той же хромосомной аномалии более чем в одном флаконе, устанавливается диагноз «истинный мозаицизм».

2. Метод in situ - культивирование и фиксация клеток на покровных стеклах в чашках Петри или специальных флаконах - слайдах. Анализ проводят по метафазным пластинкам из трех культуральных чашек (всего анализируют 10 колоний). При выявлении аномального клона анализируют всекультуры. Хромосомная аберрация, наблюдаемая лишь в одной чашке, свидетельствует о «псевдомозаицизме», более чем в одной — об «истинном мозаигшзме».

Процесс стандартного культивирования амниоцитов с момента получения образца АЖ до кариотипирования занимает в среднем 14—21 день. К недостаткам можно отнести высокую стоимость культуральных питательных сред и оборудования, что немаловажно для отечественных лабораторий, а также высокую (до 2%) вероятность контаминации образца клетками материнского происхождения.

В последние годы разработан принципиально новый подход к анализу хромосом из культивированных клеток. Метод «pipett» основан на микроманипуляционной изоляции метафазныхипрометафазныхклетокиз несуспензионных культур благодаря ихморфологическим особенностям и ослаблению связи с субстратом. Дальнейшая гипотоническая обработка и фиксация проводятся на единичных клетках. Этот способ позволяет сократить период культивирования до несколькихдней и, что особенно существенно, снизить риск диагностических ошибок, обусловленных как мозаицизмом, так и контаминацией образца. Получение прометафазных и метафазных пластинок таким способом возможно из любых первичных и перевиваемых культур. К сожалению, дорогостоящее оборудование и трудоемкость препятствуют широкому внедрению этого прогрессивного метода в клиническую практику.

- Читать далее "Цитогенетический анализ клеток ворсин хориона плаценты."


Оглавление темы "Хромосомная патология плода.":
1. Отклонения сывороточных маркеров крови как показание к пренатальному кариотипированию.
2. Программы по пренатальному кариотипированию и биохимическому скринингу в России.
3. Данные эхографии и пренатальное кариотипироваиие.
4. Формирование показаний к пренатальному кариотипироваиию.
5. Лабараторные методы пренатальной диагностики. Диагностика хромосомных болезней.
6. Основные принципы цитогенетической пренатальной диагностики.
7. Цитогенетический анализ клеток ворсин хориона плаценты.
8. Диагностические проблемы кариотипирования плода. Маркерные хромосомы. Мозаицизм хромосом.
9. Псевдомозаицизм. Мозаицизм хромосом, ограниченный плацентой.
10. Алгоритм пренатальной диагностики хромосомных болезней.
Загрузка...
   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта