Современная диагностика вирусного гепатита А. Антигены HAV
Вирус гепатита A (Hepatis A virus) идентифицирован S. Feinstone с соавторами в 1973 году. Вирус гепатита A (HAV) относят к роду Hepatovirus семейства Picornaviridae. Известно почти 30 разных штаммов и 7 генных подтипов вируса. Штаммы, выделенные на территории России, принадлежат к подтипу 1А. Все генотипы HAV имеют один и тот же антиген (НА Ag), что определяет их принадлежность к одному серотипу и моноклональный характер вырабатываемых против них антител (anti — HAV).
Морфологически HAV представляет собой сферические частицы диаметром 27-30 нм, которые построены по типу икосаэдрической симметрии, лишены оболочки. Вирусный геном представлен одноцепочечной рибонуклеиновой кислотой (RNA HAV), состоящей из приблизительно 7500 нуклеотидных оснований. Белковая оболочка (капсид) HAV построена из копий структурных протеинов.
В условиях лаборатории репликация вируса в культуре тканей не сопровождается цитолитическим действием, не подавляется ингибиторами роста пикорнавирусов (гуанидином, 2-альфа-гидросибензил-бензимидазолом). В материалах от больных и в препаратах из зараженных HAV тканевых культур могут обнаруживаться как зрелые, содержащие полноразмерную RNA HAV, так и дефектные вирионы, не содержащие или содержащие отдельные ее фракции.
Этиологическая диагностика вирусного гепатита А основана на выявлении самого возбудителя, антигенов вируса и специфических антител классов IgM, IgG.
Вирус гепатита A (HAV) присутствует в фекалиях инфицированных в последние дни инкубационного периода и на ранних стадиях болезни. В последние годы для обнаружения вируса используются чувствительные методы (РИА, ИФА). Было установлено, что вирус обнаруживается как в инкубационном периоде, так и в течение трех недель желтушного периода. Причем, если в конце инкубационного периода HAV определяется у 100% больных, то к концу 3 недели желтушного периода — только у 5% больных.
Особенностью экскреции HAV состоит в том, что наблюдается цикличность выделения Ag-содержащих и Ag-несодержащих порций материала.
Считалось, что вирусный антиген не является диагностически информативным, так как циркулирует кратковременно, как правило, в инкубационном периоде заболевания. Внедрение метода ПЦР для детекции RNA HAV позволило установить возможность продолжительность (до 500 дней и более) циркуляции RNA HAV в крови переболевших виру ным гепатитом A (CostaMattioli с соавторами, Normann с соаторами).
Для определения маркеров вируса гепатита А в крови пациентов разработан также метод ПЦР с обратной транскрипцией. По данным А. М. Глухова с соавторами, разработанный ими метод RT-PCR (гнездовой ПЦР) в основном подтверждал результаты, полученные методом ИФА и может служить дополнением к нему. Высокая активность аминотрансфераз коррелировала с высоким содержанием RNA HAV в крови пациентов.
У контактного с больным вирусным гепатитом А при отсутствии каких-либо клинико-лабораторных признаков заболевания была идентифицирована RNA HAV, что, по мнению авторов, можно расценивать как предпосылку для использования метода гнездовой ПЦР для превентивной диагностики, оценки эпидемиологической ситуации и организации противоэпидемических мероприятий в очаге.
В повседневной клинической практике подтверждением диагноза вирусного гепатита А служит обнаружение в сыворотке крови антител к HAV класса IgM. Данные антитела достигают максимальной концентрации и циркулируют в течении 4-5 недель. Затем титры антител снижаются в течение 6-8 недель до неопределяемого уровня. Обнаружение anti-HAV IgM является ранним и надежным тестом, подтверждающим клинигеский диагноз. Антитела класса IgG появляются с 3-4 недели, сохраняются в течение длительного времени и могут служить маркером ранее перенесенного вирусного гепатита А (анамнестические) или поствакцинального иммунитета.
Обследование контактных в огагах детских коллективов должно включать одновременное исследования anti-HAV IgM и активности аминотрансфераз. Положительный тест на антитела класса IgM у детей с повышенной активностью АЛТ и ACT не вызывает сомнений в диагнозе вирусного гепатита А. Клинические данные позволяют уточнить период гепатита (в том числе преджелтушный, реконвалецентный), выявить источник, оценить эпидемиологическую ситуацию в очаге, определяющую срочные и потому эффективные противоэпидемические мероприятия.
