Окраска электрофореграмм крови. Общий белок крови при патологии легких
1. ЭФГ после высушивания промывают два раза дистиллированной водой.
2. Помещают в 1% раствор HJ04 на 10 минут, затем вновь промывают два раза дистиллированной водой.
3. Помещают последовательно в две порции восстанавливающего раствора на 1 и 2 минуты соответственно. Затем ЭФГ промываем 1—2 раза дистиллированной водой.
4. ЭФГ помещают на 15 минут в реактив Шиффа.
5. ЭФГ промывают в течение 1—2 минут в промывном растворе А и затем четыре раза по 10 минут в промывном растворе В.
6. Окрашенные ЭФГ освобождают от избытка промывного раствора, поместив между листами фильтровальной бумаги, и затем сушат при комнатной температуре, лучше в темноте. Интенсивность окраски глюкопротеидов определяют в ФЭК по методу Лауреля и Скуля с небольшими изменениями. ЭФГ следует хранить в темном месте.
ЭФГ разрезают на полосы соответственно фракциям глюкопротеидов. Измеряют ширину каждой полосы. Кроме того, вырезают полоску бумаги шириной 1 см из участка, свободного от белка, для определения оптической плотности фона. Каждую полосу помещают в отдельную пробирку, в которую прибавляют 5 мл IN раствора. Пробирки ставят на 30 минут в кипящую водяную баню. После охлаждения в каждую пробирку добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты, и окраска восстанавливается. Затем в пробирку добавляют по 3,5 мл бутанола, тщательно встряхивают, чтобы вся окраска перешла в бутанол. Измерения обычно производят через 12—18 часов после злюирования краски. За это время бутанол полностью отделяется от водного слоя.
Интенсивность окраски бутанола измеряется ФЭК с зеленым светофильтром против бутилового спирта. Для вычисления истинной оптической плотности каждой фракции необходимо из полученных показаний вычесть величину окраски фона с учетом ширины этой фракции по формуле:
Д=(Д—1) (Д—0) (Л—1), где Д — истинная оптическая плотность фракции.
(Д—1) —О. П. (оптическая плотность), полученная при измерении окраски этой фракции в ФЭК.
(Д—0) —О. П. (оптическая плотность), полученная при измерении окраски фона в ФЭК.
(Л—1) — ширина полоски фракции.
Истинные оптические плотности фракций суммируют и принимают за 100%. Затем вычисляют оптическую плотность каждой фракции в отдельности в процентах.
Вопрос о белковых нарушениях при заболеваниях легких и других заболеваниях до последнего времени достаточно не изучен.
Общий белок сыворотки крови у здоровых лип колеблется в пределах 6,5—8,0, альбумины — 50,0— 64,2, белковый коэффициент— 1,2—2,0.
При оценке иммунологического состояния мы разделяем больных с опухолями и хроническими нагноениями легких на две группы: 1) мало выраженные явления интоксикации, 2) явно выраженная картина интоксикации (А. В. Григорян, 1962; К. А. Цыбырнэ, 1965).
Содержание общего белка в сыворотке крови у больных опухолями и хроническими нагноениями легких изменяется мало. Более существенные изменения наблюдались в соотношениях между белковыми фракциями сыворотки крови, которые выражаются в гипоальбуминемии и гиперглобулинемии в основном за счет альфа- и гамма-глобулинов (В. К. Гостищев, 1965; К. А. Цыбырнэ, 1965).
Данные, полученные при сопоставлении клинической картины заболевания, и данные, полученные при лабораторном исследовании фракций крови, убеждают в том, что чем тяжелее протекает процесс, тем ниже содержание альбуминов. Так как у больных 1 группы функция печени существенно не была нарушена, то большого снижения количества альбуминов у них не было обнаружено. Более существенные изменения у этой группы больных, казалось бы с мало выраженной интоксикацией, выявляются при определении глюкопротеидов. Особенно эти изменения выражены при обострении нагноительных процессов и при осложнении рака легкого вторичным нагноением.
Снижение альбуминовой фракции и повышение альфа-2-и гамма-глюкопротеидных фракций отражает степень интоксикации организма, что косвенно говорит об обострении гнойного процесса. При обострении нагноительного процесса повышается также гамма-глобулиновая фракция. При отсутствии обострения в основном происходит некоторое увеличение альфа-2-и гамма-глобулинов (К. А. Цыбырнэ, 1965).
Некоторые исследователи считают, что содержание гамма-глобулиновой фракции увеличивается при нарастании в организме иммунных антител. В связи с изменениями белковых фракций альбумино-глобулиновый индекс уменьшается.
При нагноительных процессах легких отмечаются более глубокие изменения глюкопротеидов крови, при этом изменяются не все фракции. Так, резко уменьшается альбуминовая фракция, но значительно больше, чем при определении общих белков. Существенным изменениям подвергается альфа-2-фракция и гамма-глюкопротеиды. В зависимости от колебаний альфа-2-и гамма-фракции можно судить о степени обострения воспалительного процесса.
У больных II группы содержание липопротеидов повышается. Увеличиваются как бета-, так и альфа-фракции.
Соотношение А/Г 0,7 и ниже, а также резкое снижение количества альбуминов глюкопротеидных фракций свидетельствует о выраженном нарушении иммунологического состояния больного.
