Тест тепловой неустойчивости гемоглобина - методика, показатели нормы
Тест тепловой неустойчивости гемоглобина основан на том, что в забуференной среде раствор нормального человеческого гемоглобина, подогретого 60 мин. при 50°С, остается светлым, прозрачным, неизменным, в то время как отдельные аномальные гемоглобины частично оседают при этой температуре.
Реагенты для проведения теста тепловой неустойчивости гемоглобина: буферфосфат 19,2 мл 0,1 М NaHP04, с показателем водорода 7,4 (15,6 г NaH2PO4 2Н2O/л) и 80,8 мл 0,1 M Na2HPO4 (14,2 г Nа2НРO4/л); кровь, отобранная на противосвертывающем веществе.
Метод проведения теста тепловой неустойчивости гемоглобина. К 1 мл свежеотобранной крови добавить 8—9 мл солевого физиологического раствора, процентрифугировать 10 минут при 1 500 об./мин. и удалить надосадочную массу. Повторно промыть физиологическим раствором, в одинаковых условиях. Осадок эритроцитов подвергнуть расплавлению добавлением 5 мл дистилированной воды, затем еще 5 мл буфера-фосфата, с показателем водорода 7,4.
Раствор процентрифугировать 10 мин. при 3000 об./мин. Из прозрачной надосадочной массы налить 2 мл в пробирку для гемолиза, которую погрузить на 60 мин. в ванну термостата при 50°С.
В одинаковых условиях приготовить нормальный контрольный состав.
Наличие клочкообразного осадка, увеличивающегося в последующие 2 часа, характерно для неустойчивого гемоглобина. Контрольный препарат должен остаться прозрачным, неизмененным.
Количественное определение получается измерением оптической плотности раствора гемоглобина, до помещения пробирки в термостат, к концу двухчасовой инкубации при 50°С.
