Методика реакции на пероксидазу - оценка результатов
Принцип реакции на пероксидазу по методу Грахама-Кнолля. Клеточные пероксидазы разлагают перекись водорода; высвобождаемый при этом кислород окисляет бензидин. Последний представляется в виде желто-коричневого осадка на уровне пероксидазополо-жительной зернистости.
Реагенты для реакции на пероксидазу:
1) Закрепитель: винный спирт 96° (9 частей) +40% формалин (1 часть).
2) Спиртный раствор бензидина с перекисью водорода, содержащий: несколько кристаллов бензидина, 10 мл спирта 40° и 0,02 мл 3% перекиси водорода.
После растворения бензидина в спирте профильтровать раствор и добавить перекись водорода с помощью градуированной до 0,02 мл пипетки для гемоглобина.
3) 10% разбавленный раствор Гимза.
Техника реакции на пероксидаху
Закрепление мазков в смеси спирт-формалин, 30 сек.; промывание дистилированной водой; окраска раствором бензидина и перекиси водорода — 5 мин; промывание дистилированной водой; контрастная окраска разведенным раствором Гимза — 25 мин.; в заключении промывание проточной водой.
Рекомендуется работать лишь со свежеприготовленными мазками.
Результаты реакции на пероксидаху. Желто-коричневая зернистость говорит о наличии активности клеточных пероксидаз. Реакция положительная в клетках нормального гранулоцитного ряда, начиная с промиелоцита. Миелобласт содержит пероксидазы на более развитой стадии, приближающейся к промиелоциту.
Лимфоидные клетки отрицательные. Реакция моноцитов отрицательная или слабо положительная.
Практическое значение реакции на пероксидаху. Дифференциация цитологического вида острой лейкемии: в лимфобластах отрицательная, в то время как в миелобластах активность ферментов разной интенсивности. Тела Ауера перокси дазоположительные. Значимость метода ограничена: положительная реакция составляет ценное сведение, в то время как отрицательная — не убедительна; результат следует сопоставить с другими цитохимическими исследованиями.
При отдельных тяжелых инфекциях, хронических миелопролиферациях, равно как и в процессе некоторых миелодиспластических сдвигов (предлейкемическое состояние) в зрелых нейтрофильных гранулоцитах отмечаются частично или полностью пероксидазоотрицательные зоны. Отмеченные изменения наряду с подобным поведением пероксидазы представляют ценность для раннего диагностирования предлейкемического состояния.