Методика реакции на щелочную фосфатазу лейкоцитов (ЩФЛ) - оценка результатов
Принцип реакции на щелочную фосфатазу по методу Леонарда, Израэльса и Вилькинсона. Щелочная фосфатаза лейкоцитов, после инкубации последних на глицерофосфатной питательной среде, при щелочном показателе водорода, расщепляет глицерофосфат и выделяет фосфорные ионы. Последние реагируют последовательно с нитратом кальция и нитратом кобальта. В конечном итоге образующийся фосфат кобальта реагирует с сернокислым аммонием образуя сульфид кобальта, выявляемый в виде черного осадка.
Реагенты для реакции на щелочную фосфатазу:
1) Закрепитель: винный спирт 96° (9 частей) + 40% формалин (1 часть).
2) Раствор питательной среды, состоящий из тампонированного b-глицерофосфата натрия, содержащего 15 мл 3,2% b-глицерофосфата натрия, 15 мл 10% натриевого веронала, 15 мл сернокислого магния М/10, 22,5 мл 2% нитрата кальция и 82,5 мл дистилированной воды. Раствор должен быть свеже приготовленным при окончательном показателе водорода 9,2.
3) 2% нитрат кобальта — 100 мл.
4) Слабый раствор сульфида аммония (1—2 мл сульфида на 80 мл дистилированной воды).
5) Разбавленный раствор Гимза (10%).
Техника реакции на щелочную фосфатазу
1) Закрепление мазков в смеси спирт-формалин — 30 сек.
2) Промывание проточной водой.
3) Инкубация в растворе питательной среды, состоящей из b-глицерофосфата при 37° — 3 часа.
4) Обработка предметного стекла раствором нитрата кобальта — 5 мин.
5) Тщательное промывание дистилированной водой.
6) Погружение предметного стекла в раствор сульфида аммония — на 10 сек.
7) Тщательное промывание проточной водой.
8) Контрастная окраска раствором Гимза — 25 мин. 9) Промывание проточной водой.
Рекомендуется при реакции на щелочную фосфатазу:
а) строгое соблюдение сроков реакции;
б) применение положительного контрольного препарата (мазок крови крысы или беременной женщины):
в) использование свежеприготовленных мазков.
Результаты реакции на щелочную фосфатазу
Наличие в зрелых нейтрофильных гранулоцитах цитоплазмы отдельных или скученных зерен черного цвета указывает на активность щелочной фосфатазы лейкоцитов. Степень активности определяется по резкости окраски и обозначается цифрами 0, 1, 2.
Для цифрового отображения следует определить показатель ЩФЛ, для чего необходимо проследить активность фосфатазы по меньшей мере на 100 гранулоцитах. Процент гранулоцитов 1 степени складывается с двойным процентом гранулоцитов 2 степени. Не учитываются в расчет показателя гранулоциты, лишенные активности.
При нормальных условиях значения показателя ЩФЛ колеблятся от 10 до 60. Поскольку у 16% лиц в норме показатель ЩФЛ меньше 10, низшим пределом следует считать 1—2.
Практическое значение реакции на щелочную фосфатазу заключается в возможности дифференцировать:
а) хроническую гранулоцитную лейкемию, при которой ЩФЛ очень занижен или отсутствует, от лейкемоподобной реакции, при которой значения весьма высокие;
б) хроническую гранулоцитную лейкемию от миелоидной метаплазии с миелосклерозом. Нормальный или повышенный показатель ЩФЛ свидетельствует о наличии миелоидной метаплазии, опровергая возможность лейкемии;
в) различные цитологические виды острой лейкемии. При острой лимфобластической и моноцитной лейкемии активность ЩФЛ высокая по сравнению с острой гранулоцитной лейкемией, когда последняя занижена. Для достоверности результата больной не должен подвергаться предварительной кортикотерапии;
г) вторичную полиглобулию, при которой ЩФЛ нормальный или заниженный, от истинной полицитемии, при которой этот показатель значительно повышается (более 100).
Активность ЩФЛ бывает заниженной или просто отсутствует и при иных заболеваниях, таких как, ночная пароксизмальная гемоглобинурия, стойкая анемия, дисэритропоэтическая типа II анемия, инфекционный мононуклеоз, после рентгенотерапии.
Высокая активность ЩФЛ отмечается во время беременности и после кортикотерапии.
