При использовании нефелометрии реакция антиген (исследуемый белок) — антитело (моноспецифическая антисыворотка) протекает в жидкой фазе, а образовавшиеся в результате реакции иммунные комплексы выпадают в виде нерастворимого осадка, вызывая помутнение среды. Для повышения эффективности реакции и ее ускорения реагенты помещают в раствор коллоида (обычно полиэтиленгликоля), в присутствии которого реакция заканчивается уже через несколько минут.
О количестве образовавшегося иммунного преципитата судят по мутности пробы (относительно контроля).
При нефелометрическом анализе мутность раствора определяют, регистрируя количество рассеянного света при прохождении хорошо сфокусированного монохроматического луча через исследуемый раствор. Учет реакции производят после ее окончания (по конечной точке) или по мере образования осадка. Эта модификация, называемая кинетической нефелометрией, более предпочтительна.
Для проведения нефелометрии в клинической практике удобно использовать автоматизированные системы, адаптированные для проведения серийных диагностических исследований, отвечающих критериям контроля качества. Анализаторы отличаются природой источника излучения (ртутная лампа, лазерный элемент, вольфрамовый источник), характером учета реакции (в конечной точке или по кинетике реакции) и другими техническими характеристиками, сказывающимися в конечном счете на чувствительности и точности измерений, а также на удобстве работы с прибором.
При использовании методов, основанных на регистрации изменения оптических свойств среды, образец и реагенты должны быть оптически прозрачны и не содержать веществ, образующих нерастворимые соединения с полиэтиленгликолем (например, гепарин).
Важные требования к антисывороткам — высокое сродство к антигену, обеспечивающее образование устойчивого преципитата, и высокое содержание специфических антител, поскольку при избытке антигена образуются растворимые иммунные комплексы.
Таким образом, привлекательными сторонами нефелометрии являются быстрота и точность измерения, большая пропускная способность автоматизированных систем, однако необходимы специальные оборудование и реагенты. Принципиальным преимуществом метода относительно радиальной иммунодиффузии (РИД) при исследовании иммуноглобулинопатий является то, что результаты измерений практически не зависят от размера молекул иммуноглобулинов или их фрагментов, поскольку скорость диффузии не влияет на результат.
Следует отметить, что влияние структурных дефектов молекулы на количество и качество образовавшегося преципитата не может быть исключено.
