Классический иммуноэлектрофорез по Грабарю — один из наиболее ранних методов, использовавшихся для иммунохимической идентификации компонентов белковых смесей, в частности биологических жидкостей. Он включает в себя 2 этапа.
Сначала проводят электрофорез исследуемого образца в геле агара (или агарозы), затем вдоль оси электрофорез, по бокам полосы и на всем ее протяжении в геле вырезают траншеи, в которые вносят антисыворотки различной специфичности. Во время инкубации, которая занимает около 18 ч, происходит встречная диффузия антигенов (исследуемые белки) и антител с образованием линий преципитации, каждая из которых соответствует одной системе антиген — антитело.
По расположению линий, их форме, интенсивности можно судить о качественных особенностях исследуемых белков и в некоторой степени об их количестве. Используя моноспецифические сыворотки, можно исследовать свойства отдельных компонентов белковых смесей, например сыворотки.
До недавнего времени иммуноэлектрофорез широко применяли для выявления и идентификации парапротеинов, но сейчас в большинстве ситуаций используют метод иммунофореза, которая значительно превосходит иммуноэлектрофорез по чувствительности и наглядности получаемых результатов.
Образование линий преципитации при иммуноэлектрофорезе.
А — альбумин; а,, а2, b и у — глобулины разной подвижности.
Относительно низкая чувствительность иммуноэлектрофореза связана с воздействием характера диффузии исследуемых компонентов на результирующую картину, а также с маскирующим воздействием антигенно родственных белков (например, поликлональных иммуноглобулинов и их фрагментов, других парапротеинов при множественных градиентах), присутствующих в образце.
При массивной моноклональной секреции, особенно с сопутствующим иммунодефицитом, иммуноэлектрофорез вполне подходит для анализа патологических белков. Кроме того, иммуноэлектрофорез является методом выбора при диагностике БТЦ, поскольку условия формирования преципитата в иммуноэлектрофорезе таковы, что позволяют выявить структурно дефектные белки БТЦ на фоне антигенно родственных, но полноценных в структурном отношении поликлональных иммуноглобулинов того же класса.
Один из вариантов классического иммуноэлектрофореза — метод иммуноселекции. Он отличается от иммуноэлектрофореза тем, что электрофоретическое разделение белков проводят в геле, уже содержащем определенную моноспецифическую антисыворотку. При таком разделении белки соответствующей антигенной структуры избирательно осаждаются, образуя характерный преципитат по оси электрофореза, тогда как остальные белки свободно диффундируют в геле и на следующем этапе реакции выявляются другими моноспецифическими антисыворотками, вносимыми в борозды, как и в классическом варианте иммуноэлектрофорез.
Этот метод очень удобен, например, для выявления незначительной секреции белков БТЦ, когда при обычном иммуноэлектрофорезе картина неубедительна.
