Несмотря на достоинства РНГА и РСК, использование этих реакций для эпидемиологического обследования сопряжено с целым рядом технических трудностей: сложностью приготовления диагностикума для непрямой гемагглютинации, громоздкостью постановки РСК, плохой сохранностью реагентов и другими. В связи с этим был также испытан метод иммуноферментного анализа (ИФА), хорошо зарекомендовавший себя в диагностике типичного легочного парагонимоза (С.В.Шитер, Г. И.Суханова, 1989).
Методика Yun-Ichi Imai (1987) здесь не дала удовлетворительных результатов вследствие низкой тропности парагонимозного антигена к полистиролу и была модифицирована.
Чтобы исключить неспецифическое связывание иммуноглобулинов, в лунки планшета после сорбции антигена вводили раствор альбумина в концентрации, превышающей концентрацию белков исследуемой сыворотки, чтобы он блокировал поверхности, свободные от антигена. Кроме того, было исключено применение детергентов на всех этапах отмывки планшетов, что предотвратило вымывание антигена (экстракт гомогената трематод) и связанных с ним антител. Другие же реагенты разводили буфером с детергентом, чтобы предотвратить неспецифическое связывание антител. Для исключения сенсибилизации планшетов антигеном и учета возможного неспецифического связывания иммуноглобулинов на каждую исследуемую сыворотку ставились 2 опытные и 1 контрольная пробы. Кроме того, каждый планшет имел контроль с заведомо положительными и отрицательными сыворотками.
Методика ИФА очень удобна, так как даже при ручной обработке проб один специалист в течение 5 часов мог исследовать от 600 до 900 сывороток. Чувствительность, специфичность и диагностичность данной реакции на собственном материале оказались весьма высокими и равнялись 97,9% по каждому из этих критериев. Диагностическая ценность ИФА, в ряде случаев превышающая таковую при РНГА, отмечена и рядом других авторов (S. Pariyanonda et al., 1990), и отдельные перекрестные реакции, зарегистрированные при фасциолезе и клонорхозе, ее не снижают (В. К. Lim et al., 1990; W. Malelwong et al., 1990).
Иммуноферментный анализ с применением моноклональных антител также высоко специфичен для дифференциальной диагностики парагонимоза и туберкулеза -здесь перекрестных реакций не регистрировалось вообще (Z. Zany et al., 1993). В эксперименте максимальная интенсивность положительных результатов ИФА при парагонимозе отмечена на 10-12-й неделе после заражения (В. К. Zim et al., 1990).
Различные структурные элементы парагонима имеют разную степень антигенности, и основной антиген локализуется в кишечном эпителии. Далее по степени убывания антигенной активности идут: кишечное содержимое, яйца червя, железы, яйца в матке, паренхима. Так, из P. heterotremus было выделено 9 разновидностей антигена с молекулярным весом от 12,3 до 123 КДа, при этом наибольшая стойкость положительных реакций при ИФА обнаружена с антигеном 31,5 КДа (W. Malelwong et al., 1992). Однако все исследователи признают, что для целей практической диагностики вполне пригоден антиген, приготовленный из целой трематоды (Sh. Lee et al., 1989; Т. Ikeda et al., 1991).
Таким образом, РНГА и ИФА -наиболее приемлемые реакции для серологической диагностики как типичного, так и ларвального парагонимоза в современной клинике, а иммуноферментный анализ может быть признан лучшим методом скрининга этих заболеваний.
