Гематология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Гематология:
Гематология
Физиология крови
Методы исследования
Анемии
Острые лейкозы
Миелодиспластические синдромы (МДС)
Хронические лейкозы
Лимфомы
Гистиоцитозы - гистиоцитоз Х
Макроглобулинемии
Коагулопатия
Патология тромбоцитов
Переливание крови
Трансплантация стволовых клеток
Книги по гематологии
Иностранные книги по гематологии
Рекомендуем:
Остальные разделы:
Абдоминальная хирургия
Анатомия человека
Акушерство
Биология
Генетика
Гепатология
Гигиена труда
Гинекология
Гистология
Дерматология
Оз и Оз
Кардиология
Лучевая медицина
Микробиология
Неврология
Неотложная хирургия
Отоларингология
Офтальмология
Профилактика заболеваний
Психология
Пульмонология
Физиология человека
Скорая помощь
Стоматология
Топографическая анатомия
Травматология
Фармакология
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Радиальная иммунодиффузия (РИД) плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность

Радиальная иммунодиффузия (РИД) — это широко распространенный метод количественного определения иммуноглобулинов и других белков в биологических жидкостях, поскольку технически прост и не требует дорогостоящего оборудования.

Принцип метода радиальной иммунодиффузии заключается в следующем. Строго определенное количество сыворотки вносят в лунки, вырезанные в слое геля, содержащего соответствующую моноспецифическую антисыворотку. При последующей инкубации антиген диффундирует из лунки в гель и образует преципитат в виде кольца. Площадь кольца соответствует объему геля, содержащего антитела в количестве, эквивалентном количеству внесенного антигена, т. е. при стандартных условиях опыта площадь кольца прямо пропорциональна концентрации данного белка в сыворотке.

Сравнивая размер колец исследуемых сывороток и стандартной сыворотки, содержащей известное количество данного белка, рассчитывают его концентрацию в изучаемых образцах.

Время инкубации пластин довольно значительно. При исследовании иммуноглобулинов оно составляет от 18 ч при незавершенной диффузии (менее точной) и до нескольких дней при завершенной диффузии. Кроме того, имеются принципиальные методические ограничения, которые необходимо учитывать при использовании радиальной иммунодиффузии.

Во-первых, структура исследуемого белка должна быть идентична структуре белка-стандарта, поскольку их разные диффузионные и антигенные свойства могут приводить к существенной ошибке. Например, присутствие в сыворотке мономерного IgM и полимерного IgA (при парапротеинемиях) ведет к ошибке измерения, поскольку нормальный IgM, содержащийся в стандарте, представлен пентамером, а поликлональный IgA — в основном мономером.

Во-вторых, концентрация исследуемого белка не должна значительно превышать концентрацию белка в стандарте, поскольку экстраполирование калибровочной кривой дает ложные результаты. При исследовании сывороток с высокими концентрациями исследуемых белков их следует предварительно разводить до концентрации, близкой к таковой в стандарте.

В-третьих, антисыворотка, включенная в агар, должна быть моноспецифической (т. е. не содержать антител к другим белкам). При несоблюдении этого условия возможно появление двойных колец преципитации, каждое из которых соответствует одной системе антиген — антитело, что в конечном счете ведет к ошибочной трактовке результатов.

этапы радиальной иммунодиффузии (РИД)

В определенных случаях в гель целенаправленно вносят не моно-, а биспецифическую антисыворотку (т. е. антисыворотку, содержащую антитела двух разных видов). Модификация радиальной иммунодиффузии, получившая название «метод двойных колец» и основанная на использовании биспецифических антисывороток, была разработана Е. В. Чернохвостовой и соавт. и применена ими для выявления и дифференциальной диагностики иммуноглобулинопатий, в том числе парапротеинемии.

В радиальной иммунодиффузии (РИД) двойные кольца преципитации образуются при следующих условиях:

1) антисыворотка должна содержать антитела к двум разным детерминантам молекулы иммуноглобулина;
2) в исследуемой сыворотке должны присутствовать как молекулы, имеющие обе детерминанты и реагирующие с обоими видами антител (они образуют плотное кольцо преципитации), так и молекулы, реагирующие с антителами только одной специфичности (и образующие поэтому преципитат более низкой плотности);
3) соотношение обоих типов молекул должно быть таким, чтобы размеры кольца низкой плотности были больше, чем размеры плотного кольца (иначе более светлый преципитат не будет виден).

Если антисыворотка против IgG содержит также антитела против одной L-цепи (к или X), то в радиальной иммунодиффузии с сыворотками, содержащими G-парапротеины гетерологичного типа, формируются двойные кольца.

Наружное (более светлое) кольцо образуется за счет парапротеина, который реагирует с антителами только к у-цепи, а внутреннее плотное кольцо — за счет нормального IgG гомологичного типа, который реагирует с антителами и к у-цепи, и к L-цепи. Сыворотки, содержащие G-парапротеин гомологичного типа, дают одно большое плотное кольцо, образующееся за счет G-парапротеина и антител обоих видов, при этом светлый преципитат, образованный остатками поликлонального гетерологичного IgG, не виден.

Метод двойных колец с использованием антисывороток — систем у+к и у+h, чрезвычайно удобен для выявления и типирования G-парапротеинов, а также парапротеинов других классов, определения соотношения к/h, белка Бенс-Джонса в сыворотке и моче, количества нормального IgG при G-парапротеинемиях.

- Читать далее "Нефелометрия плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность"


Оглавление темы "Макроглобулинемии - парапротеины":
  1. Электрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  2. Иммунофиксация плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  3. Иммуноэлектрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  4. Радиальная иммунодиффузия (РИД) плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  5. Нефелометрия плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  6. Методика иммунохимического исследования парапротеинов - принципы
  7. Значение иммунохимического анализа в диагностике парапротеинемий
  8. Показания к иммунохимическому исследованию крови, плазмы, биологических жидкостей
  9. Моноклональные гаммапатии неясного генеза (МГНГ) - причины, варианты, диагностика
  10. Болезни тяжелых цепей (БТЦ) - причины, история изучения
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта