Гематология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Гематология:
Гематология
Физиология крови
Методы исследования
Анемии
Острые лейкозы
Миелодиспластические синдромы (МДС)
Хронические лейкозы
Лимфомы
Гистиоцитозы - гистиоцитоз Х
Макроглобулинемии
Коагулопатия
Патология тромбоцитов
Переливание крови
Трансплантация стволовых клеток
Книги по гематологии
Иностранные книги по гематологии
Рекомендуем:
Остальные разделы:
Абдоминальная хирургия
Анатомия человека
Акушерство
Биология
Генетика
Гепатология
Гигиена труда
Гинекология
Гистология
Дерматология
Оз и Оз
Кардиология
Лучевая медицина
Микробиология
Неврология
Неотложная хирургия
Отоларингология
Офтальмология
Профилактика заболеваний
Психология
Пульмонология
Физиология человека
Скорая помощь
Стоматология
Топографическая анатомия
Травматология
Фармакология
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Иммунофиксация плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность

Иммунохимически идентифицировать белки на электрофореграмме без потери наглядности и четкости классической электрофоретической картины позволяет метод иммунофиксации (ИФ).

При выполнении иммунофиксации на одной и той же пластине с агарозным гелем проводят несколько электрофоретических разделений исследуемого образца, после чего один из треков окрашивают сразу после окончания фореза (он служит контролем), а на поверхность остальных наносят антисыворотки определенной специфичности.

В месте расположения белка, прореагировавшего с родственной ему антисывороткой, через некоторое время (обычно в пределах часа) образуется преципитат, который полностью сохраняет форму и положение изучаемой фракции. Предварительно отмыв несвязавшиеся белки солевым раствором, пластины окрашивают. Зону миграции белка уточняют, соотнося положение преципитата, образованного этим белком, с контрольной фореграммой.

Иммунофиксацию широко используют в диагностике моноклональной секреции. К наиболее типичным ситуациям относятся:
1) иммунохимическая идентификация небольших М-градиентов, особенно при нормальном содержании поликлональных иммуноглобулинов;
2) выявление и идентификация скрытых М-градиентов, когда моноклональный белок мигрирует в зоне а- или b-глобулинов и маскируется нормальными белками этих фракций, особенно при низком уровне продукции.

В ряде случаев иммунофиксация позволяет распознать так называемые ложные М-градиенты — электрофоретически гомогенные полосы, напоминающие М-градиент, но не относящиеся к иммуноглобулинам. Отсутствие специфического преципитата в зоне такой полосы при реакции с антисыворотками к Н- и L-цепям иммуноглобулинов позволяет отвергнуть предположение о наличии парапротеина в исследуемом образце.

иммунофиксация парапротеинов
Выявление и характеристика М-градиента в сыворотке крови методом иммунофиксации в геле агарозы.
При проявлении электрофореграмм антисыворотками к а- и к-цепям иммуноглобулинов в b2-зоне выявлен М-градиент, образованный парапротеином Ак (указан стрелкой).

Иммунофиксация является методом выбора при анализе множественной секреции, если в образце присутствуют два и более М-градиентов.

Помимо высокой специфичности и разрешающей способности, достоинством метода является также его высокая чувствительность. Это объясняется двумя факторами: накоплением белка (антител) в зоне градиента при образовании специфического преципитата и минимальной диффузией антигена при реакции с антисывороткой. При иммунофиксации можно выявить следовые М-градиенты, которые не видны на окрашенной электрофореграмме.

Основная методическая трудность — подбор адекватного разведения образца для получения плотного, хорошо видимого преципитата. Если образец разведен недостаточно, то преципитат может раствориться в избытке антигена (исследуемый белок). При слишком большом разведении образца образовавшийся преципитат можно не увидеть. В обоих случаях имеет место ложноотрицательный результат.

В последние годы благодаря исключительно высокой информативности метода и появлению коммерческих диагностических наборов, укомплектованных высокоаффинными антисыворотками (что приводит к получению стабильных результатов), иммунофиксация в большинстве диагностических ситуаций оттеснила на второй план традиционный иммуноэлектрофорез (ИЭФ).

Чувствительность иммунофиксации можно значительно повысить, если использовать для разделения белков противоточный изотахофорез (ИТФ) на ацетат-целлюлозной мембране, предложенной Г. И. Абелевым и соавт.. Это метод электрофореза в неоднородной системе буферов, имеющих общий катион, но разные анионы.

При изотахофорезе (ИТФ) ионы разделяемого образца располагаются в порядке уменьшающейся электрофоретической подвижности между двумя видами анионов буфера: «ведущим» (с более высокой подвижностью) и «замыкающим» (с меньшей подвижностью). Изотахофорез (ИТФ) позволяет одновременно с разделением концентрировать в 10—100 раз белки, находящиеся в высокоразбавленных растворах.

В связи с этим метод хорошо подходит для выявления и индентификации белка Бенс-Джонса в моче, а также для исследования малобелковых биологических жидкостей, доступных в небольшом объеме, ограничивающем предварительное концентрирование (церебральная и слезная жидкости, слюна и т. д.).

- Читать далее "Иммуноэлектрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность"


Оглавление темы "Макроглобулинемии - парапротеины":
  1. Электрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  2. Иммунофиксация плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  3. Иммуноэлектрофорез плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  4. Радиальная иммунодиффузия (РИД) плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  5. Нефелометрия плазмы, биологических жидкостей, парапротеинов - принципы, эффективность
  6. Методика иммунохимического исследования парапротеинов - принципы
  7. Значение иммунохимического анализа в диагностике парапротеинемий
  8. Показания к иммунохимическому исследованию крови, плазмы, биологических жидкостей
  9. Моноклональные гаммапатии неясного генеза (МГНГ) - причины, варианты, диагностика
  10. Болезни тяжелых цепей (БТЦ) - причины, история изучения
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта