MedUniver Физиология человека
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Эндокринная система
Пищеварительная система
Физиология клеток крови
Обмен веществ. Питание
Выделение.Функции почек
Репродуктивная функция
Сенсорные системы
Физиология иммунной системы
Система кровообращения
Дыхательная система
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

мРНК участвующие в синтезе антител. Методы изучения мРНК

В настоящее время наметилось два подхода — химический и иммунохимический. В основе первого лежит химическое фракционирование мРНК, выделенных из клеток, продуцирующих иммуноглобулины. Основными этапами являются: выделение из мисломных клеток микросом или связанных с мембранами полирибосом (Stavnezer е. а., 1971; Milstein е. а., 1972); экстракция из них РНК в условиях, предупреждающих их деградацию; фракционирование РНК в градиенте плотности сахарозы; выделение фракций, соответствующих по размерам предполагаемой мРНК; очистка их от рибосомальных РНК на колонках с олиго((1Т)- или поли (У)-целлюлозой (или сефарозой), задерживающих только богатые аденнловыми основаниями мРНК (полиА-мРПК), и исследование биологической активности выделенных фракций.

В ряде случаев для дополнительной очистки препаратов мРНК используется электрофорез в полнакрпламидном геле в присутствии 99%-ного формамида (Farace е. а., 1976; Matthyssens с. а., 1976). С теми или иными вариациями приведенная выше схема используется в настоящее время подавляющим большинством исследователей. Выход индивидуальной полиА-мРНК обычно составляет 0,01% от внесенного количества РНК (Brownlee е. а., 1973). В результате в настоящее время выделено нз плазмоцитом МОРС 70Е, МОРС 21, МОРС 41 несколько мРНК, кодирующих как Н-, так и L-цепи. Чистота большинства этих препаратов не превышает 40—60%.

Лишь одной группе авторов удалось недавно таким способом получить мРНК более чем 90%-ной чистоты (Matthyssens е. а., 1976). Это не удивительно. Использованный метод основан, во-первых, на разделении молекул РНК по их молекулярному весу и, во-вторых, на отделении популяции полиЛ-содержащих РНК от лишенных ее.

синтез антител

Естественно, что в клетках может присутствовать ряд мРНК с аналогичными свойствами, не имеющих отношения к иммуноглобулинам. Все эти РНК неизбежно будут загрязнять препараты индивидуальной иммуноглобулиновой РНК. Очевидно, что в зависимости от относительной доли синтезируемого клетками иммуноглобулина этих примесей будет либо больше, либо меньше.

Поэтому для выделения мРНК из миелом, синтез иммуноглобулинов в которых достигает 30—40% от синтеза всех белков вообще, этот метод может быть использован; в то же время для выделения мРНК, кодирующих синтез иммуноглобулинов, из нормальных лимфоидных тканей, особенно из чрезвычайно гетерогенной по клеточному составу селезенки, он явно непригоден.

Значительно более перспективным, с нашей точки зрения, является иммунохимический подход к решению этой проблемы. Преимущество его заключается в том, что уже первый этап фракционирования предполагает строго специфическое выделение индивидуальных полирибосом с помощью антител к синтезируемому этими полирибосомами белку. Существует три варианта этого метода. Первый — осаждение полирибосом антителами к синтезируемому ими белку в присутствии носителя, т. е. того же самого белка (копреципитация) (Delovitch е. а., 1972; Laskov, Mitelman, 1975).

Второй — обработка полирибосом антителами к синтезируемому ими белку и осаждение полученного комплекса антисывороткой к антителам (непрямая преципитация) (Schechtcr, 1973, 1974а). И третий — извлечение индивидуальных полирибосом с помощью иммуносорбентов, содержащих ковалентно или нековалентно связанные антитела к синтезируемому на полирибосомах белку (Сидорова и др., 1973; Sidorova с. а., 1974; Любимова и др., 1975). Из полученных таким образом индивидуальных полирибосом тем или иным способом экстрагируют полисомные РНК и извлекают мРНК, пропуская эту смесь через колонки с олиго- или поли (У)-целлюлозой. С помощью иммунохимического подхода удалось получить препараты мРНК примерно 95%-ной чистоты.

- Читать далее "Трансляция мРНК. Особенности трансляции мРНК при синтезе антител"


Оглавление темы "Отдельные этапы формирования иммуноглобулинов":
1. Полирибосомный комплекс в синтезе антител. РНК участвующие в синтезе антител
2. мРНК участвующие в синтезе антител. Методы изучения мРНК
3. Трансляция мРНК. Особенности трансляции мРНК при синтезе антител
4. Предшественники синтеза L-цепи антител. Экстрапептиды и их функция
5. Свойства мРНК антител. Структура мРНК иммуноглобулинов
6. Длительность существования мРНК антител. Влияние мРНК на синтез иммуноглобулинов
7. Гены синтезирующие антитела. Количество генов участвующих в синтезе иммуноглобулинов
8. Гибридизация мРНК и ДНК антител. Локализация V- и С-генов в геноме иммуноглобулинов
9. Сборка антител. Комплементация иммуноглобулинов
10. Стабилизация структуры иммуноглобулинов. Внутренние связи антител
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта