Полирибосомный комплекс в синтезе антител. РНК участвующие в синтезе антител
О функции мембранного компонента в настоящее время известно очень немного. Сопоставление синтеза иммуноглобулинов в системах, содержащих микросомы или выделенные из них полирибосомы, показало, что мембранный компонент играет роль в инициации образования полирибосомного комплекса (Abraham е. а., 1974), в превращении предшественников L-цепей в зрелые цепи (Milstein е. а., 1972) и в сборке Н- и L-цепей в молекулу иммуноглобулина (Vassalli е. а., 1971). По-видимому, в мембранах имеются факторы, как угнетающие, так и стимулирующие синтез белков, в том числе и иммуноглобулинов.
По данным Вассалли (Vassalli, 1967), к числу факторов, угнетающих синтез иммуноглобулинов, может относиться, в частности, АТФаза, активность которой в микросомах селезенки и лимфоузлов крыс в 15—20 и 7 раз выше, чем, например, в микросомах печени. Это может приводить к нарушению образования амииоацил-тРНК и ускорению деацилирования преформированного комплекса амииоацил-тРНК. Помимо этого, в микросомальной мембране содержится и какой-то фактор, угнетающий реакцию переноса аминокислот с тРНК на рибосомы. Этот фактор удается обнаружить в солюбилизированной мембране.
К числу содержащихся в мембранах промоторов синтеза иммуноглобулинов относятся трансфераза I, способствующая присоединению аминоацил-тРНК к акцепторному участку на малой рибосомной субъединице, и трансфераза II, осуществляющая транслокацию пептидил-тРНК с акцепторного участка на соответствующий пептидиловый центр большой субъединицы. Наконец, в мембранах же содержатся все ферменты, осуществляющие гликозилированне иммуноглобулинов.
Таковы основные результаты исследований, полученные на естественных бесклеточных системах. Очевидно, возможности, представляемые такими системами, далеко не исчерпаны, однако в последние годы «центр тяжести» переместился на искусственные системы. Этому в значительной степени способствовало развитие техники фракционирования нуклеиновых кислот и трансляции их в различных бесклеточных.
Выделение нативных полирибосом, синтезирующих иммуноглобулины, позволяло перейти к прямому исследованию размеров и структуры мРНК, кодирующих синтез полипептидных цепей иммуноглобулинов. Впервые это было сделано на клетках мышиной плазмоцитомы МРС. Для определения размеров мРНК клетки метили 10—15 мин 3Н-уридином, выделяли из них 270S- и 190S-полирибосомы, экстрагировали из последних РНК и фракционировали ее в градиенте плотности сахарозы. Быстрометящиеся РНК из 270S- и 1905-полирибо-сом обладали константами седиментации 14—16S и 9—11S соответственно.
Эти опыты положили начало целой серии исследований структуры и свойств мРНК, кодирующих цепи иммуноглобулинов. Они легли в основу исследования молекулярных механизмов синтеза иммуноглобулинов.
Первоочередной задачей проводимых исследований являлось выделение индивидуальных мРНК, ответственных за синтез Н- и L-полипептидных цепей иммуноглобулинов. Наиболее удобным объектом для этого оказались миеломы, продуцирующие L-цепи.
