MedUniver Физиология человека
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Эндокринная система
Пищеварительная система
Физиология клеток крови
Обмен веществ. Питание
Выделение.Функции почек
Репродуктивная функция
Сенсорные системы
Физиология иммунной системы
Система кровообращения
Дыхательная система
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Рекомендуем:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Гормоны щитовидной железы и ядро клетки. Определение концентрации гормонов

Тиреоидные гормоны тироксин и трийодтиронин обусловливают стимуляцию процессов транскрипции специфических генов в ядре. Осуществляя эту задачу, гормоны связываются с белком-рецептором, локализованным в ядре. Эти рецепторы — преимущественно протеины, расположенные на хромосомах; они одинаково контролируют функцию как промоутеров, так и операторов генов.

Существуют две важные особенности влияния тиреоидных гормонов на ядро клетки.
1. Гормоны активируют генетические механизмы продуцирования многих типов клеточных белков — вероятно, 100 или более. Многие из белков являются ферментами, способствующими усилению метаболической активности практически во всех клетках организма.

2. Однократно связавшись с внутриклеточными рецепторами, гормоны щитовидной железы могут обеспечивать контроль экспрессии гена в течение нескольких дней и даже недель.

Большинство гормонов присутствуют в крови в чрезвычайно малых количествах; концентрации некоторых из них составляют одну биллионную миллиграмма (1 пикограмм) в миллилитре крови, поэтому очень трудно определить их концентрацию обычными химическими методами. Чрезвычайно чувствительный метод был предложен около 40 лет назад, который революционизировал способы определения гормонов, их предшественников и их метаболитов в крови. Этот метод называют радиоиммунологическим исследованием.
На первом этапе радиоиммунологического исследования получают высокоспецифические антитела к гормону, количество которого хотят определить.

гормоны щитовидной железы

На втором этапе (1) небольшое количество антител добавляют к раствору, содержащему гормон, количество которого определяют; (2) одновременно добавляют определенное количество очищенного стандартного гормона, снабженного радиоактивной меткой. Необходимо соблюдать одно важное условие: антител должно быть недостаточно для полного связывания с радиоактивным гормоном и свободным гормоном, содержащимся в исследуемом растворе, в этом случае свободный гормон в исследуемом растворе и радиоактивный стандартный гормон конкурируют за фрагменты реагирования антител. В процессе их конкуренции возможность быть связанными с фрагментами реагирования антител пропорциональна концентрации каждого из них в исследуемом растворе.

На третьем этапе (после того, как в процессе связывания с антителами установится равновесие) комплекс антитело-гормон отделяютя от остального раствора, и количество радиоактивного гормона, связанного с антителом в комплексе, определяют обычными радиологическими методами исследования.

Если большое количество радиоактивного гормона оказалось связанным с антителами, то очевидно, что количество свободного гормона, конкурирующего с радиоактивным за связывание с антителами, было мало и, следовательно, его концентрация в исследуемом растворе была низкой. Напротив, если связанным оказалось небольшое количество радиоактивного гормона, это означает, что количество определяемого свободного гормона, конкурировавшего с радиоактивным за связывание с антителами, оказалось большим.

Чтобы сделать определение количественно точным, на четвертом этапе процедуру радиоиммунологического исследования выполняют для стандартных растворов, содержащих нерадиоактивный гормон в разной концентрации. Затем строют стандартную кривую, как показано на рис. 74-9. Путем сопоставления количества радиоактивного гормона в «неизвестном» растворе со стандартной кривой можно определить концентрацию гормона в «неизвестном» растворе с точностью от 10 до 15%. Этим методом могут быть определены такие ничтожно малые количества гормона, как биллионная или даже триллионная часть грамма.

Фермент-связывающий иммуносорбентный метод исследования (ELISA) можно использовать для количественного определения любых белков, включая гормоны. Этот метод сочетает специфичность, свойственную иммунологическому тестированию, с чувствительностью ферментного исследования. На рисунке показаны основные элементы этого метода, который выполняют на пластиковом планшете с 96 ячейками. Каждая ячейка заполнена раствором с антителами (АБ), специфичными для определяемого гормона. В каждую ячейку добавляют пробы или стандартные растворы, затем — другие антитела (АБ2), которые также специфичны для гормона, но связываются с другим его участком реагирования. Третье антитело (АБ3) добавляют, чтобы узнать АБ2. В то же время оно связывается с ферментом, превращающим пригодный субстрат в продукт, который легко может быть определен колориметрическим или флюоресцентным оптическими методами.

Каждая молекула фермента катализирует образование многих тысяч молекул продукта, поэтому может быть обнаружено даже небольшое количество молекул гормона. По сравнению с методами конкурентного радиоиммунологического исследования при методе ELISA используют избыточное количество антител, поэтому все молекулы гормона захватываются в комплексы гормон-антитело. В связи с этим количество гормона, присутствующего в исследуемой пробе или стандартном растворе, пропорционально количеству образующегося продукта.

Метод ELISA нашел широкое применение в клинических лабораториях, поскольку: (1) не требует применения радиоактивных изотопов; (2) позволяет одновременно использовать 96 ячеек планшета и автоматизировать выполнение большого количества исследований; (3) обеспечивает экономичное и точное определение концентрации гормонов.

- Вернуться в оглавление раздела "Физиология человека."


Оглавление темы "Гормональная регуляция в организме":
1. Воздействие чрезвычайно низких температур на организм. Отморожения
2. Химические посредники организма. Гормоны
3. Классы и типы гормонов. Синтез гормонов
4. Регуляция секреции гормонов. Отрицательная обратная связь при секреции гормонов
5. Транспорт гормонов. Очищение крови от гормонов
6. Рецепторы гормонов. Количество и чувствительность гормонов
7. Рецепторы гормонов связанные с G-белком. Фермент-сопряженные рецепторы гормонов
8. Внутриклеточные рецепторы гормонов. Механизмы вторичных посредников
9. Фосфолипиды как вторичные посредники. Система кальций-кальмодулин как вторичный посредник
10. Гормоны щитовидной железы и ядро клетки. Определение концентрации гормонов
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта