MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Особенности химических методов инактивации вирусов. Принципы химической инактивации.

В опытах с герпесвирусом типа I крупного рогатого скота установлено, что в процессе инактивации формальдегидом эпитопы гликопротеинов g I, g II и g IV на 80% теряют способность связывать соответствующие моноклональные антитела. Однако это не коррелировало с их способностью вызывать антительный ответ. Инактивация формальдегидом энтеровирусов не влияла на распознавание группоспецифического антигена Т клетками. В изготовлении инактивированных вакцин, кроме формальдегида, нашел применение глютаровый альдегид. Он вызывает агрегацию вирионов благодаря образованию межмолекулярных связей в результате взаимодействия формальдегида с аминогруппами поверхностных белков вирионов. При сшивке белковых молекул альдегидом блокируется до 2/3 остатков лизина. Инактивация глютаральдегидом не сопровождается заметным снижением антигенных свойств вирусов, вероятно, благодаря полимеризации белковых молекул.

Бета-пропиолактон представляет собой высокоактивный алкилирующий агент, нестойкий в водных растворах и легко гидролизуемый с образованием безвредных веществ: гидроакриловой и бета-оксипропионовой кислот. В связи с этим отпадает необходимость в нейтрализации избытка бета-пропиолактона и продуктов его распада.

Бета-пропиолактон оказывает инактивирующее действие на многие вирусы. При оптимальной концентрации бета-пропиолактона снижается инфекционность вируса ньюкаслской болезни без существенного изменения гемагглютинирующей, нейраминидазной и гемолизирующей активности. Бета-пропиолактон разрушает инфекционность вируса Сендай, не влияя на его антигенные свойства. Высказано предположение, что потеря инфекционности вирусами Сендай и ньюкаслской болезни обусловлена взаимодействием бета-пропиолактона с вирусным геномом. С помощью бета-пропиолактона удалось получить высокоактивные вакцины против бешенства и неинфекционные антигенноактивные препараты вируса катаральной лихорадки овец, а также инфекционного бронхита птиц.

Инактивация вирусов бета-пропиолактоном зависит от концентрации инактиватора, температуры взаимодействия и содержания белка в вирусной суспензии. Повышение концентрации бета-пропиолактона может привести к нежелательной реакции с вирусными белками и, вследствие этого, к снижению антигенной активности.

инактивация парвовирусов

Из других химических веществ для инактивации вирусов представляет интерес гидроксиламин, который, как и бета-пропиолактон, полностью разлагается в течение короткого периода. Инактивирующее действие гидроксиламина определяется его взаимодействием с пиримидиновыми основаниями нуклеиновой кислоты, зависящим от величины рН. В слабокислой среде происходит, главным образом, изменение цитозина, а в щелочной — урацила. Обработка некоторых вирусов (полиомиелита, бешенства, западного и восточного энцефаломиелита лошадей, гриппа, ньюкаслской болезни, осповакцины и др.) гидроксиламином при оптимальном режиме инактивации не приводила к существенным изменениям их антигенной активности, что позволило использовать это вещество для изготовления диагностических антигенов и инактивированных вакцин.

В последние годы внимание исследователей привлекли азиридины, и особенно этиленимин и его производные. Этиленимин - насыщенное, гетероциклическое соединение, впервые было синтезировано из бромэтиламина в 1988 г.. Этиленимин, как и другие азиридины, относится к группе высокореакционных алкилирующих соединений, обладающих токсичностью.

Этиленимин и его производные оказывают сильное инактивирующее действие на вирусы, сохраняя их антигенные свойства. Инактивирующий эффект этиленимина на вирусы, по-видимому, объясняется депуринизацией и последующей деполимеризацией нуклеиновых кислот. Замена формальдегида этиленимином основывалась на следующих преимуществах. В отличие от формальдегида, вызывающего образование поперечных связей в вирусных белках, этиленимин оказывал влияние только на нуклеиновую кислоту. При 25°С инактивация вируса представляла собой быстрый, легко контролируемый линейный процесс, а полученные при этом полностью неинфекционные антигены оказались удобными в дальнейшей переработке — концентрировании и очистке.

Изучение кинетики инактивации вируса леса Семлики ацетилэтиленимином показало возрастание скорости инактивации с увеличением температуры (до 40°С) и концентрации инактиватора (до 0,1%). Оптимальной оказалась температура 37°С, так как при ее снижении ниже 23°С вирус полностью не инактивировался, а при повышении — происходила термоинактивация вируса и потеря протективных свойств. Отмечена перспективность применения ацетилэтиленимина для приготовления инактивированных вакцин против тогавирусов.

Для инактивации вирусов чаще применяют ацетилэтиленимин (АЭИ) и особенно димер этиленимина (ДЭИ), который значительно менее токсичен по сравнению с этиленимином. Использование азиридинов для приготовления инактивированных противовирусных вакцин во многом обязано исследованиям с вирусом ящура.

Одним из стимулов к проведению этой работы были часто наблюдаемые «хвосты» инфекционного вируса в противоящурных вакцинах, инактивированных формалином. Так, в результате обработки 0,05%-ным формальдегидом в течение 144 ч при температуре 26°С и рН 8,9 не получали полной инактивации, тогда как 0,05%-ный ацетилэтиленимин оказался высокоэффективным при воздействии в течение всего 12 ч при 37°С [60].

Азиридины применяли и для инактивации других вирусов, в частности, бешенства (0,05% АЭИ, 65 ч, 37°С), псевдобешенства (0,05% АЭИ, 4% 37°С), пар-вовируса свиней (ЭИ-5 ММ, 48-72 ч, 26°С), везикулярной болезни свиней, классической чумы свиней и гриппа А.

Имеются сообщения о большой эффективности производных этиленимина по сравнению с другими инактивирующими агентами. Преимущество заключалось в получении безопасных препаратов с выраженными антигенными свойствами. Преимущества АЭИ по сравнению с бета-пропиолактоном доказаны на примере вирусов ящура, везикулярной болезни свиней и других вирусов. При инактивации вируса лейкоза крупного рогатого скота оптимальные результаты получены с АЭИ и ДЭИ. Оба агента вызывали инактивацию инфекционности вируса, не изменяя активности вирусного гликопротеина, тогда как при инактивации формалином наблюдалось существенное снижение антигенной активности. При инактивации вирусов с дцРНК этиленимин и его производные действовали менее эффективно. Инактивация некоторых вирусов в присутствии CuS04 происходила без потери иммуногенности.

- Читать далее "Методика химической инактивации вирионов. Примеры методов химической инактивации вирусов."


Оглавление темы "Вакцинопрофилактика вирусных инфекций.":
1. Липосомы в вакцинах в виде адъювантов. Характеристика липосом.
2. Поверхностноактивные адъюванты. Характеристика поверхностноактивных адъювантов.
3. Действие адъювантов на орально вводимые антигены. Безопасность адъювантов.
4. Вакцинопрофилактика. Вирусные вакцины.
5. Классификация вирусных вакцин. Типы вирусных вакцин.
6. Инактивированные вакцины. Свойства инактивированных вакцин.
7. Методы инактивации вирусов. Химические методы инактивации вирусов.
8. Особенности химических методов инактивации вирусов. Принципы химической инактивации.
9. Методика химической инактивации вирионов. Примеры методов химической инактивации вирусов.
10. Производство химически инактивированных вакцин. Современные химически инактивированные вакцины.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта