MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Методика химической инактивации вирионов. Примеры методов химической инактивации вирусов.

Химическая инактивация вирионов технически проста. Однако надежное подавление инфекционности нередко сопровождается существенным снижением других видов биологической активности, в том числе иммуногенности. К тому же, в ряде случаев требуется нейтрализация инактивирующих агентов.

Можно сказать, что все инактивирующие агенты в той или иной степени вызывают изменения как в нуклеиновой кислоте, так и в белковой оболочке. При этом характер изменений вирусных частиц во многом определяется природой инактивирующего агента и возбудителя.

Приготовление эффективных инактивированных вакцин из некоторых оболочечных вирусов (вирус кори, респираторно-синцитиальный и др.) оказалось трудной задачей, поскольку все оболочечные вирусы имеют сложную липопротеиновую оболочку (липидный бислой с встроенными белками), наружные белки которой играют основную роль в индукции протективного иммунитета и часто денатурируются в процессе инактивации и последующего хранения.

Изучение воздействия химических инактиваторов на эпитопы гликопротеинов вируса лихорадки долины Рифт показало, что вскоре после начального периода инактивации этиленимин мало действует на эпитопы. Бета-пропиолактон в значительной мере изменяет структуру семи эпитопов, а формальдегид частично воздействует на конфирмационную структуру большинства из них. Эпитопы всех инактивированных антигенов отличаются сниженной способностью реагировать со специфическими моноклональными антителами в случае хранения их более 6 мес.

химическая инактивация вирионов

Опытным путем на различных вирусах установлено, что при щадящих условиях инактивации, как правило, вначале теряется инфекционность, а затем антигенность. Считается, что чем больше разница во времени между утратой этих свойств, тем перспективнее режим инактивации данного вируса.

Изучение механизма взаимодействия инактивирующих факторов с нуклеиновыми кислотами и белками вирусов, а также выяснение структурных и функциональных модификаций этих макромолекул поможет сделать выбор оптимальных условий инактивации вирусов с учетом их групповых и индивидуальных особенностей.

Первым реагентом для изготовления многих вирусных инактивированных вакцин был формальдегид. Около 50 лет назад была предложена инактивированная формалином сорбированная вакцина против ящура, технологию изготовления которой совершенствовали в течение многих лет. На ранних этапах широкого применения такой вакцины имели место случаи неполного обезвреживания вируса ящура, что нередко приводило к вспышкам заболевания в европейских странах. Все это создало необходимость изыскать новые методы инактивации, обеспечивающие полную потерю инфекционных свойств вируса без снижения его антигенности, в результате чего предпочтение было отдано ацетилэтиленимину.

Однако в последнее время представлены новые доказательства в пользу пригодности формальдегида для приготовления безопасной противоящурной вакцины. Этому способствовало использование фильтрованной вирусной суспензии, инактивация вируса перед добавлением ГОА и соблюдение общепринятого режима инактивации (0,04% формалина; рН 8,5; 25°С). Исключение адсорбации вируса перед добавлением формалина значительно облегчает контроль кинетики инактивации вируса, а также позволяет проводить очистку и концентрирование инактивированного вирусного антигена. При длительном хранении иммуногенность формолвакцины была выше, чем вакцины, инактивированной АЭИ. Сохранность полных вирионов (146S-частиц) через 1 год (4°С) после инактивации формальдегидом глицилальдегидом и бета-пропионлоктоном соответственно составляла 30—50%, 80—90% и 10—20%.

Д. Солк и сотрудники, используя культуральный вирус и формалин, впервые в истории профилактики полиомиелита получили безопасную инактивированную вакцину. Фильтрованный вирус инактивировали формалином (1:4000; 37°С; рН 7,0; 12 суток). В дальнейшем, инактивированная формалином трехвалентная вакцина против полиомиелита повышенной активности была приготовлена в институте Мерье (Франция) из вируса, выращенного в культуре клеток Vera на микроносителе.

Вакцина против болезни Тешена, инактивированная бета-пропиолактоном, оказалась более иммуногенной, чем формолвакцина, полученная аналогичным образом, тогда как другие исследователи при создании инактивированных вакцин против африканской чумы лошадей и болезни Тешена отдавали предпочтение формалину.

Вирус африканской чумы лошадей инактивировали бета-пропиолактоном (30 мин, 25°С) или формалином (48 ч, 25°С). Иммуногенная активность обоих антигенов, сорбированных на гидрате окиси алюминия, была одинаковой. Бета-пропиолактон оказался эффективным средством при изготовлении инактивированных вакцин против ныокаслской болезни и везикулярной болезни свиней.

Вирус гепатита А, адаптированный к культуре клеток человека, концентрировали преципитацией сульфатом аммония и инактивировали бета-пропиолактоном. Вакцина обладала выраженной антигенностью, вызывая длительную персистенцию антител у вакцинированных животных. Другие авторы при изготовлении вакцины против гепатита А вирус выращивали в культуре диплоидных клеток человека MRC-5. Очищенный и концентрированный вирус инактивировали формальдегидом, консервировали 2-феноксиэтанолом, а в качестве адъюванта добавляли ГОА. Одна доза (1 мл) вакцины, содержащая 720 ед. (ИФА) вирусного антигена, вызывала практически 100%-ную сероконверсию у взрослых, а после бустеризации обеспечивала защиту сроком не менее 10 лет. Аналогичная вакцина при испытании на обезьянах и морских свинках обладала выраженной антигенностью и иммуногенностью.

Инактивированная вакцина против гепатита А была лицензирована в ряде европейских стран. Лицензированная вакцина 5 KB для взрослых содержала 1,440 единиц/мл вирусного антигена (определение в стандартном ИФА), 0,5 мг. А1(ОН)3 в качесте адъюванта и 2-феноксиэтанол в качестве консерванта. Первичную иммунизацию проводили внутримышечно одной дозой вакцины, бустеризация — через 6—12 месяцев усиливала иммунитет. Для иммунизации детей использовали уменьшенную дозу вакцины. При ускоренном методе старения при 37°С вакцина сохраняла активность 3 недели, а при 2-8°С - 15 месяцев.

Другой аналогичной лицензированной вакциной является вакцина VAQTA. Очищенный концентрированный частично аттенуированный вирус инактивировали формальдегидом и сорбировали на гидрате окиси алюминия. У вакцинированных шимпанзе в течение 2 недель развивались ВНА и они были защищены от внутривенного заражения вирулентным вирусом гепатита А. Обе инактивированные вакцины были безопасны и иммуногены для людей.

Инактивированную сорбированную вакцину против кори применяли трехкратно. Иммунизация сопровождалась образованием различного уровня нейтрализующих антител и антител, подавляющих ГА. Вакцинированные пациенты были защищены от заболевания в течение нескольких месяцев после иммунизации. Титр антител быстро снижался и они вновь становились чувствительными к естественному заражению.

- Читать далее "Производство химически инактивированных вакцин. Современные химически инактивированные вакцины."


Оглавление темы "Вакцинопрофилактика вирусных инфекций.":
1. Липосомы в вакцинах в виде адъювантов. Характеристика липосом.
2. Поверхностноактивные адъюванты. Характеристика поверхностноактивных адъювантов.
3. Действие адъювантов на орально вводимые антигены. Безопасность адъювантов.
4. Вакцинопрофилактика. Вирусные вакцины.
5. Классификация вирусных вакцин. Типы вирусных вакцин.
6. Инактивированные вакцины. Свойства инактивированных вакцин.
7. Методы инактивации вирусов. Химические методы инактивации вирусов.
8. Особенности химических методов инактивации вирусов. Принципы химической инактивации.
9. Методика химической инактивации вирионов. Примеры методов химической инактивации вирусов.
10. Производство химически инактивированных вакцин. Современные химически инактивированные вакцины.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта