Гистологические исследования в гематологии. Показания к трепанобиопсии
Из гистологических методов исследования в гематологии наиболее часто используются трепанобиопсия костного мозга и биопсия лимфатических узлов.
Основные показания к трепанобиопсии:
1) диагностика хронических миелопролиферативных заболеваний (истинная полицитемия, сублейкемический миелоз, эссенциальная тромбоцитемия), кроме хронического миелолейкоза;
2) диагностика апластической анемии;
3) определение стадии лимфогранулематоза и неходжкинских лимфом (поражение костного мозга — признак IV стадии);
4) спленомегалия неясного генеза (для исключения хронических миелопролиферативных заболеваний).
По показаниям трепанобиопсия может использоваться и в других случаях (определение полноты ремиссии острого лейкоза, диагностика множественной миеломы, выявление характера поражения костного мозга при хроническом лимфолейкозе и др.).
Трепанобиопсия проводится с помощью игл (трепанов) Jamshidi. Биопсию проводят в области задневерхнего бугра правой и/или левой подвздошных костей. Размеры биоптата должны позволить получить гистологические срезы площадью не менее 40 мм2 (2x20 или 3x15 мм). Для гистологического заключения необходим просмотр не менее 5 неповрежденных костномозговых ячеек.
Если большую часть препарата занимает надкостница, кортикальная пластинка губчатой кости и субкортикальные костномозговые ячейки, трепанобиопсию необходимо повторить.
Лучшие результаты обеспечивает фиксация столбика ткани в фиксаторах, содержащих сулему (ценкерформол, В5). Для декальцинации костной ткани применяют насыщенный раствор хелатирующего соединения или кислоты. Возможно использование заливки недекальцинированных трепанобиоптатов в полимеризующиеся смолы.
Обязательна окраска срезов гематоксилин-эозином, азур II-эозином, по Перлсу; для дифференциальной диагностики хронических миелопролиферативных заболеваний необходимо выявление ретикулиновых волокон с помощью импрегнации срезов серебром (по Футу, Гордону-Свиту и др.).
Результаты гистологического исследования костного мозга (трепанобиоптата) должны характеризовать:
1) клеточность;
2) соотношение миелоидного и эритроидного ростков;
3) созревание клеток миелоидного ряда;
4) созревание клеток эритроидного ряда;
5) состояние эозинофильных гранулоцитов и наличие тучных клеток;
6) состояние мегакариоцитарного ростка;
7) присутствие других клеток (лимфоцитов, плазмоцитов, гистиоцитов);
8) стромальные реакции (гранулемы, фиброз, некроз, серозная атрофия жира, отек);
9) наличие и количество гемосидерина;
10) сосудистые нарушения (амилоидоз и др.);
11) изменения костной ткани (остеопороз, болезнь Педжета и др.);
12) наличие метастазов.
Биопсия. Для биопсии пригодны практически все органы и ткани. Проведение операционной биопсии лимфатического узла показано при любой лимфоаденопатии (кроме типичных случаев реактивного лимфаденита). В ряде случаев необходимо проведение пункции внутренних органов (обычно печени, значительно реже — селезенки), которая чаще всего проводится в условиях хирургического стационара.
При диффузном процессе возможна неприцельная биопсия, при очаговом поражении целесообразно ее проведение под контролем УЗИ или компьютерной томографии. В некоторых случаях (изолированное увеличение висцеральных лимфатических узлов, очаговое поражение ребер, позвоночника и др.) получение материала, необходимого для морфологического исследования, возможно только при хирургическом вмешательстве.
Наиболее часто применяется биопсия лимфатических узлов с последующим цитологическим и гистологическим исследованием. Аспирационная биопсия позволяет получить материал, необходимый для диагностики инфекционных поражений лимфатических узлов (методами классической бактериологии) и обнаружения метастазов солидных опухолей.
Для диагностики лимфопролиферативных заболеваний необходима операционная биопсия лимфатического узла с последующим гистологическим и иммуногистохимическим исследованием. Частичное иссечение лимфатического узла (инцизионная биопсия) используется в ситуациях, когда у пациента имеется конгломерат лимфатических узлов. Во всех остальных случаях иссекают лимфатический узел целиком (эксцизионная биопсия).
Биопсию лимфатических узлов головы и шеи при отсутствии противопоказаний проводят под общей анестезией. При генерализованной лимфоаденопатии используют биопсию шейных, надключичных, подмышечных лимфатических узлов. Биопсия паховых лимфатических узлов нежелательна (они нередко несут следы массивной антигенной стимуляции, что затрудняет интерпретацию гистологических изменений).
Для иссечения выбирают наиболее измененный, крупный, глубоко лежащий лимфоузел. Во время операции стараются браншами пинцета захватывать лимфатический узел только за капсулу.
До погружения лимфоузла в фиксирующую жидкость его необходимо острым лезвием рассечь на две части через ворота по малому диаметру. Со свежей поверхности среза каждой части делают мазки-отпечатки для цитологического исследования. Для проводки и заливки кусочки вырезают после того, как рассеченный лимфатический узел профиксируется в течение нескольких часов. Плохая фиксация сильно влияет на размеры ядер клеток и строение гетерохроматина (ядра клеток имеют большие размеры).
Обязательна окраска срезов гематоксилин-эозином, азур II-эозином и применение иммуногистохимических реакций.
