МедУнивер - MedUniver.com Все разделы сайта Видео по медицине Книги по медицине Форум врачей  
Рекомендуем:
Микробиология:
Микробиология
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Видео по микробиологии
Книги по микробиологии
Форум
 

Выращивание вируса во вращающейся колонне. Культивирование вирусов для производства вакцин.

Однослойные культуры клеток, выращенные в многотрубчатом культиваторе, оказались весьма эффективными для получения различных вирусов в больших количествах. В качестве прототипа ниже приведено схематическое описание выращивания вируса в культуре клеток во вращающейся колонне.

Клетки трипсинизированной ткани куриного эмбриона суспендируют в питательной среде Игла, содержащей сыворотку крупного рогатого скота. Культуральный аппарат ставят в вертикальное положение таким образом, чтобы ввод находился на нижней распределительной пластинке. Воздушный фильтр оставляют открытым. В культуральные сосуды (стеклянные трубки) на 1 см2 поверхности вносят по 0,2 мл питательной среды и 5х104 клеток. Стеклянные трубки заполняют на 1/5, что обеспечивает благоприятное соотношение газа и жидкости (4:1).

После этого аппарат с суспензией клеток быстро переворачивают в горизонтальное положение и вращают вокруг продольной оси со скоростью 5 об/ч. При такой угловой скорости клетки равномерно распределяются на поверхности сосуда. Выращивание клеток длится 4-5 дней при температуре 37°С. При этом образуется монослойная культура, которую можно видеть при микроскопическом исследовании. После формирования сплошного слоя культуральное устройство вновь ставят в вертикальное положение и удаляют ростовую питательную среду, а культуру промывают изотоническим солевым раствором.

Вирус ньюкаслской болезни в среде 199 (10 ТЦЦ50/мл), вносят в культураль-ный аппарат (приблизительно 0,01 мл на 1 см2 поверхности), возвращают аппарат в горизонтальное положение и вращают 1—3 ч для адсорбции вируса. Затем монослой промывают поддерживающей средой, вносят ее по 0,2 мл на 1 см2 и аппарат с инфицированной культурой инкубируют в течение необходимого времени для максимального размножения вируса.

культивирование вируса бешенства

Внеклеточный вирус получают путем однократного или повторного слива питательной среды из культурального аппарата в приемник, а связанный с клетками — с помощью раствора трипсин-версена. С этой целью кулыуральный аппарат вращают в течение нескольких минут, чтобы клетки отделились от стенок стеклянных трубок.

Аналогичный трубчатый лабораторный культиватор использовали для выращивания стабильных линий клеток Vero, BS-C-1, IMH-P и первичной культуры клеток куриного эмбриона с целью продукции вирусов кори, краснухи, полно- и герпесвирусов.

Вирусы при изготовлении инактивированной вакцины против болезни Марека выращивали с использованием культиваторов со вставленными в них цилиндрическими стеклянными трубками.

Многодисковые и многотрубчатые культиваторы можно с успехом использовать для массового выращивания различных вирусов на различных клеточных субстратах. С той же целью могут быть применены многолотковые системы фирмы Nunc (Дания) площадью 6000 см2 и батарейные многолотковые системы, объединяющие 40 лотков с общей рабочей поверхностью 24 000 см2. Многолотковые системы можно соединять в любых комбинациях.

Для выращивания вируса краснухи в больших объемах использовали реактор со стеклянными бусами диаметром 3 мм, на которых выращивали клетки Vero. Циркуляция питательной среды (MEM с 10% сыворотки эмбрионов коров) обеспечивалась насосом, газовой фазой служил воздух с 5% С02. При инфицировании вирусом содержание сыворотки в среде снижали до 2%. Вирусную жидкость сливали через каждые 24 ч, заменяя свежей, и хранили при температуре -70°С. Выход вируса составлял 10,0 lg ТЦД50/мл. Титрование вируса по ТЦД50 хорошо коррелировало с определением его концентрации по тесту ИФА.

При изготовлении живых вакцин для ветеринарной практики используют преимущественно однослойные первичные культуры. Такие препараты часто обладают высокой экономичностью (в 1 мл содержится 10-100 и более иммунизирующих доз). Для их производства не требуется больших количеств вирусного материала, вирусы размножают в однослойных статических или роллерных культурах.
В статье приведены основные культуральные вакцины для людей и животных, испытанные в экспериментальных условиях или применяемые в практике.

В ветеринарной практике ряда стран широко применяют культуральные живые вакцины против чумы плотоядных, чумы свиней, ринотрахеита и диареи крупного рогатого скота, болезни Ауески, ньюкаслской болезни, болезни Марека, катаральной лихорадки овец и ларинготрахеита птиц и др.

Кроме урожая вируса, его антигенности и приживляемости в организме, с клеточным субстратом может быть связана безопасность применения вакцины.
Для широкого применения методов групповой иммунизации животных необходимо значительное увеличение расхода живых вакцин и, соответственно, расширение масштабов их производства. В таком случае, существующие способы размножения вакцинных штаммов следует существенно модернизировать.

Выращивание вируса инфекционной анемии лошадей обычно проводят в культурах лейкоцитов или клеток костного мозга лошади, селезенки эмбриона лошади или постоянной линии клеток кожи лошади (CCL-57), что дает возможность получить антиген, пригодный для диагностики этого заболевания. Продуктивно инфицированные постоянные линии клеток часто используют для получения вируса лейкоза крупного рогатого скота и лейкемии кошек.

С целью повышения активности культуральных антигенов для серологических реакций часто уменьшают объем среды при заражении культур или используют только клетки инфицированных культур в период выраженного цитопатического эффекта, обрабатывая их соответствующим образом.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

Оглавление темы "Методология выращивания вирусов.":
1. Выращивание вирусов. Методика выращивания вирусов.
2. Факторы влияющие на размножение вирусов. Размножение вирусов в культуре.
3. Особенности культирования вирусов гепатита. Культивирование вируса гриппа.
4. Культуры диплоидных клеток. Адаптирование вирусов к культуральным средам.
5. Смена вирусной культуральной среды. Изменения вирусов при смене среды.
6. Температурный режим культивирования вирусов. Накопление вируса в среде.
7. Протеолитическая активация вирусов. Многофакторность размножения вирусов.
8. Однослойная культура клеток для вирусов. Размножение вирусов в однослойной культуре.
9. Применение однослойных клеточных культур. Выращивание вируса в однослойной культуре.
10. Выращивание вируса во вращающейся колонне. Культивирование вирусов для производства вакцин.
Медунивер - поиск Чат в Telegram Мы в YouTube Мы в Вконтакте Мы в Instagram Форум консультаций наших врачей Контакты и реклама
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Ваши вопросы и отзывы: