Культуры диплоидных клеток. Адаптирование вирусов к культуральным средам.
Культуры диплоидных клеток тестикулярной ткани ягнят используют в производстве живой вакцины против классической чумы свиней, а тканей легкого эмбриона крупного рогатого скота — для размножения вакцинных штаммов, вирусов чумы крупного рогатого скота и оспы овец. Полевой изолят вируса геморрагической болезни кроликов размножался в штамме клеток почки кролика (DJRK), вызывая ЦПЭ после двух пассажей.
Для выделения и репродукции некоторых вирусов используют специальные линии клеток. Например, для вирусов диареи и ринотрахеита крупного рогатого скота высокочувствительными оказались линии клеток слизистой оболочки носа крупного рогатого скота и легких норок, для многих вирусов свиней — гомологичные линии клеток, а для ротавирусов — линия клеток обезьян (МА-104).
Постоянные линии клеток, полученные из одних и тех же тканей одного вида животного, так же как их сублинии (клеточные клоны), могут значительно различаться между собой спектром чувствительности и вирусной репродукцией.
Продукция вируса лейкоза крупного рогатого скота в хронически инфицированных однослойной и суспензионной культурах в зависимости от используемой сублинии клеток FLK (foetal lamb kidney) может различаться в 10 раз. Клонированные сублинии клеток ВНК-21 значительно различались между собой чувствительностью к некоторым типам и штаммам вируса ящура. В суспензионной культуре клеток ВНК-21 по мере длительного пассирования (200 пассажей) наблюдается снижение выхода вируса ящура вследствие нарушения морфогенеза на стадии прокапсида.
Адаптированные к размножению вне организма штаммы вируса размножаются в культурах, как правило, быстрее и с большим выходом, чем неадаптированные «дикие» штаммы. Лучше всего размножаются штаммы, адаптированные к данной культуре, хотя их размножению часто способствует первоначальная адаптация к другим клеточным культурам. Многие вирусы, элективной системой для которых являются культуры клеток гемопоэ-тической системы естественного хозяина, хорошо размножаются в них без адаптации.
При адаптации вирусов, размножающихся медленно и не вызывающих или вызывающих слабый ЦПЭ, целесообразно однослойные инфицированные культуры инкубировать длительно (2—4 недели) и использовать пересев инфицированных клеток. В качестве примера может служить вирус иммунодефицита кошек (штамм Петалюма), который вызывал ЦПЭ в культуре клеток кошачьей Т4-тимус-лимфомы 3101 через 22 дня после заражения.
Адаптация некоторых вирусов и вирусных штаммов к размножению в культуре клеток — трудный процесс, который требует нетрадиционных подходов. Для адаптации вируса гриппа к новой хозяинной системе предложено использовать метод форсированных пассажей, при котором проводят серию одноцикловых репликаций вируса. Для серийных пассажей применяют «ранний» урожай вируса без разведения. Положительные результаты получали при сокультивировании инфицированных клеток и тех, к которым желательно адаптировать вирус.
Способный к размножению в организме кроликов штамм L вируса чумы крупного рогатого скота адаптировали в культуре клеток его путем культивирования смеси лимфоцитов селезенки зараженного кролика и клеток Vero в присутствии ПЭГ. Внеклеточный вирус не обнаруживали в течение трех пассажей. К 11 пассажу вирус накапливался в титре 5,5 lg ТЦД50/мл и кроме клеток Vero приобрел способность размножаться в клеточных линиях ВНК-21, С-1, К-13 непермис-сивных для исходного штамма вируса. Линия клеток (FLK — BLV), хронически инфицированная вирусом энзоотического лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), получена при сокультивировании клеток почки плода овцы и лимфоцитов крупного рогатого скота, инфицированного ВЛКРС.
Вирус иммунодефицитоподобного заболевания крупного рогатого скота выделяли от естественно и экспериментально инфицированных телят сокультивированием клеток крови с клетками селезенки плода коров. Индуцированное вирусом образование синцития реже наблюдали в культурах клеток почки и легкого плода коров. Вирус иммунодефицита кошек (FIV) удается выделить путем инокуляции периферической крови или спинномозговой жидкости больных животных в первичную культуру клеток глии, лимфоцитов или мононуклеарных клеток крови кошек. Цитопатический эффект наблюдали через 8—14 дней после сокультивации (клеточные агрегаты синцитий, цитоплазматические вакуоли).
При культивировании вне организма одни вирусы обладают широким хозяинным спектром (герпес-, рабдовирусы), другие — узким (napBos коронавирусы). В последнем случае адаптация вируса к некоторым культурам обычно принятыми методами не удается. Попытки адаптировать вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней к постоянной линии клеток почек поросят (линия LL C-PKI) оказались безуспешными в отличие от культуры клеток щитовидной железы свиньи.
При культивировании in vitro важное значение могут иметь изменения вирусов, обусловленные клетками хозяина. Вирус ньюкаслской болезни, пассируемый в первичной культуре клеток КЭ, по морфологии, плавучей плотности и устойчивости при градиентном центрифугировании значительно отличался от вируса, размноженного в КЭ.
