МедУнивер - MedUniver.com Все разделы сайта Видео по медицине Книги по медицине Форум врачей  
Рекомендуем:
Микробиология:
Микробиология
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Видео по микробиологии
Книги по микробиологии
Форум
 

Постоянная клеточная линия для выращивания вирусов. Непрерывное культивирование вирусов.

Постоянная (непрерывная) клеточная линия — это клетки, способные субкультивироваться вне организма в течение неограниченного количества пассажей. На уровне знаний о поведении культивируемых клеток невозможно определить точку, когда культура становится стабильной, т. е. приобретает способность расти до бесконечности. Только на основе опыта с фибробластоподобными клетками человека показано, что культура должна субкультивироваться, по крайней мере, 70 раз с интервалом примерно в три дня, прежде чем ее можно будет считать постоянной (непрерывной) линией клеток.

Все культуры с неограниченной способностью к размножению («бессмертные культуры») следует называть постоянными (непрерывными) или стабильными линиями. В вирусологической литературе широко распространен термин «перевиваемые линии клеток», под которым имеются в виду линии клеток, способные к бесконечному росту вне организма.

Под трансформацией клеток подразумевают необратимые генетические изменения, характеризующиеся изменением ростовых свойств культивируемых клеток. Трансформация делает клетки бессмертными и менее зависимыми от питательных факторов и геометрических параметров роста. Изменение ростовых свойств связано с изменением транспортировки питательных веществ через клеточную мембрану и является одной из адаптивных особенностей, позволяющих клеткам размножаться в условиях, неблагоприятных для не трансформированных родительских клеток.

Изменение клеточной мембраны сопровождается потерей поверхностного белка (150 кД) и изменением антигенных свойств. Основное достоинство трансформированных клеток - способность к бесконечному размножению и улучшенные ростовые свойства. Трансформированные клетки могут образовывать опухоли у иммунологически толерантных животных. По этой причине трансформацию иногда неправомерно приравнивают к злокачественным изменениям. Первичные культуры клеток, линии диплоидных и трансформированных клеток получили широкое применение в вирусологической практике и явились основой создания крупномасштабных систем культивирования клеток и производства вакцин.
Это, в свою очередь, потребовало усовершенствования методов культивирования, организации коммерческого производства сред и аппаратуры для культур клеток.

культура клеток щитовидной железы и цитомегаловирус

Получение постоянных линий намного расширило исследования в области клеточной биологии и вирусологии. На их основе появилась возможность получения мутантных и гибридных линий клеток, что открыло перспективу создания новых субстратов, пригодных для культивирования вирусов. Нормальные клетки удается субкультивировать вне организма в течение ограниченного количества пассажей, после чего их размножение прекращается и они, как правило, погибают. Это обычно происходит примерно после 50 генераций, если клетки получены из тканей взрослого организма.

Лишь иногда они способны продолжать размножаться в культуре неограниченно долго, превращаясь в так называемые трансформированные постоянные клеточные линии. Трансформация клеток в культуре имеет полиэтиологическую природу. Спонтанная трансформация культур клеток нормальных тканей — относительно редкое событие. Частоту таких трансформаций можно увеличить, обработав клетки мутагенами или некоторыми вирусами.

Все постоянные клеточные линии, в отличие от культур нормальных клеток с ограниченным сроком жизни, являются трансформированными, т. е. измененными по ряду признаков, главным из которых является «бессмертие». Способность к неопределенно длительному размножению в культуре, как правило, связана с анеуплоидным кариотипом. Некоторые линии клеток (например, фибробластов хомячка — ВНК-21) хотя и обладают правильным диплоидным числом хромосом, но их кариотип, по-видимому, изменен. Другие критерии трансформации (онкогенность, контактное торможение требования к среде) проявляются у различных линий неодинаково.

Все они получены в результате спонтанной или индуцированной трансформации клеток в организме или в культуре. Многие происходят из опухолей животных, хотя не всегда при эксплантации опухолевых клеток in vitro образуются клеточные линии. Линии клеток, полученные непосредственно из опухолевых тканей (т.е. трансформированных в организме), часто сохраняют специализированные функции, например, способность продуцировать некоторые ферменты в течение более продолжительного периода, чем клетки, трансформированные в культуре различными методами (физическими, химическими, вирусными агентами). Частота получения постоянных линий у различных видов млекопитающих неодинакова.

Клетки мышей подвергались спонтанной трансформации значительно чаще, чем клетки человека или других млекопитающих. Указанные различия, по-видимому, связаны с неодинаковой стабильностью кариотипа разных видов животных.

Субкультивирование клеток, а затем и становление постоянной клеточной линии, были более успешными, когда первичную однослойную культуру получали путем посева механически измельченной ткани, чем из суспензии трипсинизированных клеток. Возможно, это связано с уменьшением количества белка в поверхностных структурах клеток в результате обработки трипсином. Для трансформации клеток часто используют вирусы. Клетки почки новорожденного хомяка (ВНК), например, легко трансформируются вирусом полиомы или вирусом SV-40, а клетки эмбриона хомяка - герпесвирусом типа 3 лошадей. В последнем случае клеточные линии экспрессировали вирус-специфические белки, но не продуцировали вирусного потомства.

Трансфекция культуры клеток почки эмбриона человека онкогеном вируса SV-40 увеличивала период размножения in vitro от 15-20 до 70-90 поколений. Из популяции таких клеток удалось выделить две постоянные линии, практически не имеющие признаков трансформации. В результате трансфекции гепатоцитов нормальных крыс ДНК вируса SV-40 получена серия клеточных линий SV-40 гепатоцитов. С помощью рекомбинантного вектора SV-40-аденовируса получены различающиеся по свойствам постоянные линии клеток стромы костного мозга человека, экспрессирующие большой Т-антиген вируса SV-40. Т-штамм вируса ретикулоэндотелиоза кур вызывал трансформацию культур клеток печени, селезенки, костного мозга, а также тимуса куриных эмбрионов и молодых цыплят. Подавляющее большинство трансформированных линий клеток секретировало вирус, вызывающий летальный ретикулоэндотелиоз у 1—2-дневных цыплят.

Предпочтительными сайтами интеграции вирусного генома оказались ломкие участки в геноме млекопитающих, что обусловлено, по-видимому, их структурными и функциональными особенностями. Результатом взаимодействия вирусного и клеточного геномов могут явиться хромосомные аномалии и приобретение клетками способности к неограниченному размножению.

При длительном культивировании клеточные линии могут изменять те или иные свойства, поэтому для поддержания исходных свойств расплодки клеток, их хранят при низкой температуре и периодически берут для размножения и практического использования. Например, в процессе многих циклов выращивания клеток ВНК-21 в однослойной культуре могут значительно изменяться их первоначальные свойства. Нормальный равномерный рост фибробластоподоб-ных клеток может смениться ростом эпителиоподобных клеток, образующих слои и грозди. От свойств сыворотки также зависит скорость роста клеток и чувствительность к разным типам и штаммам вируса ящура.
Большинство таких изменений характерно для трансформированных клеток других линий.

- Также рекомендуем "Виды культур клеток в биотехнологии вирусов. Культуры лимфобластоидных и миеломных клеток."

Оглавление темы "Биотехнологии в вирусологии.":
1. Дефектные интерферирующие вирусные частицы. ДИ-частицы вирусов.
2. Типы взаимодействия вирусов с клетками. Особенности воздействия вирусов на клетки.
3. Культивирование вирусов. Биотехнологии в вирусологии.
4. Опасность культивирования вирусов. Осложнения вирусной биотехнологии.
5. Среды для выращивания вирусов. Клеточные субстраты в вирусологии.
6. Постоянная клеточная линия для выращивания вирусов. Непрерывное культивирование вирусов.
7. Виды культур клеток в биотехнологии вирусов. Культуры лимфобластоидных и миеломных клеток.
8. Контаминация клеточных культур в вирусологи. Загрязнение культуры с вирусами.
9. Вирусная контаминация в вирусологи. Борьба с вирусной контаминацией.
10. Проверка клеточной культуры на контаминацию вирусами. Вирусы контаминирующие клеточные культуры.
Медунивер - поиск Мы в Telegram Мы в YouTube Мы в Вконтакте Мы в Instagram Форум консультаций наших врачей Контакты и реклама
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Ваши вопросы и отзывы: