Чума уток (вирусный энтерит уток) - остропротекающая болезнь водоплавающих птиц, характеризующаяся лихорадкой, геморрагическим диатезом и обильной диареей. Источником возбудителя, вероятно, являются дикие утки. Болеют утки всех возрастов. При остром течении заболевания гибель наступает внезапно. Болезнь регистрируется в странах Европы, Азии и Америке. Переболевание сопровождается напряженным иммунитетом, передаваемым трансовариально потомству. Материнский иммунитет продолжается 2-3 недели. С целью специфической профилактики применяют живые вакцины. Для получения аттенуированных штаммов вирус пассируют в утиных (УЭ) и куриных эмбрионах (КЭ). Для полной аттенуации вируса при сохранении выраженной иммуногенности обычно достаточно 5—10 пассажей в УЭ и 20 - в КЭ. Эмбриональные и культуральные варианты аттенуированных штаммов вируса ЧУ используют для вакцинации уток.
Аттенуированные штаммы не реактогенны для уток различного возраста, обладают выраженными протективными свойствами, не передаются горизонтально и не обладают риверсибельностью. Они хорошо переносят лиофилизацию и при длительном хранении сохраняют активность. Однократное внутримышечное введение вакцин (4,0 lgТЦД50) через три дня защищает практически всех привитых уток от экспериментальной летальной инфекции вирулентным штаммом вируса. В организме вакцинированных утят через 20 дней после не удавалось обнаружить вирулентный штамм вируса. Длительность иммунитета зависит от возраста вакцинированной птицы и обычно составляет 3—5 мес. Напряженный иммунитет быстро восстанавливается после ревакцинации. Материнские антитела подавляют активный иммунитет у утят в течение первых 2—3 недель жизни. Применение живой вакцины оказалось весьма эффективным средством профилактики чумы уток. Аэрозольная иммунизация живой вакциной против чумы уток оказалась неэффективной.
Ринотрахеит кошек
Ринотрахеит, вызываемый герпесвирусом типа 1 кошек (ГВК-1), - основное респираторное заболевание кошек, встречающееся у 50-75% животных данного вида. Заболевание клинически напоминает калицивирусную инфекцию. Наблюдают некротические изменения эпителия верхних дыхательных путей и в отдельных случаях бронхопневмонию. Хотя аборты имеют место, но трансплацентарное инфицирование плодов не происходит. Для профилактики заболевания предложены живые и инактивированные вакцины. Первые готовят из аттенуи-рованного штамма вируса, размноженного в культуре клеток почек котят. Для аттенуации вирулентного штамма вируса требовалось не менее 50 пассажей при температуре 33-35°С. Живая сухая вакцина, полученная из такого штамма, безопасна и высокоэффективна.
Аттенуированный штамм сохранял выраженную антигенность и пригодность в качестве вакцинного после 300 и более пассажей в культуре клеток. Кошки, привитые интраназально живой вакциной (Katavak-СН) из термочувствительного штамма (0,5 lgTIXH,50), становились устойчивыми к интраназальному заражению вирулентным штаммом (7,0 lgTim50). Вакцинация сопровождалась незначительной реакцией и выделением вакцинного вируса в течение шести дней. Устойчивость к экспериментальному заражению обнаружена через четыре дня. Экскреция вирулентного вируса была низкой. Инактивированую вакцину получали из культурального ГВК-1 с помощью БПЛ. Напряженный иммунитет и высокий титр гуморальных антител отмечали после двукратного введения вакцин. Антитела сохранялись в крови в течение 10 мес. и в это же время имел место бустерный эффект на повторную вакцинацию, а также обнаружена антителозависимая цитотоксичность, обусловленная лейкоцитами.
Аденовирусы
Аденовирусы впервые были выделены в 1953 г. из аденоидов человека и получили соответствующее название. Семейство аденовирусов включает два рода Mastadenoviras и Aviadenovirus. В состав рода мастаденовирусы входят аденовирусы млекопитающих: человека (более 50 серотипов), обезьян (24 серотипа), крупного рогатого скота (10 серотипов), лошадей (2 серотипа), овец (6 серотипов), коз (2 серотипа), свиней (4 серотипа), собак (2 серотипа), мышей (1 серотип), кроликов (1 серотип).
Род авиаденовирусы включает аденовирусы кур (12 серотипов), индеек (4 серотипа), гусей (3 серотипа), уток (2 серотипа) и фазанов (1 серотип).
Патогенные аденовирусы известны у 13 видов домашних животных. Высказано предположение, что млекопитающие и птицы могут заражаться аденовирусом, относящимся к разным родам. Аденовирусы вызывают заболевания, характеризующиеся легким поражением органов дыхания, пищеварения и конъюнктивы. Некоторые из них вызывают злокачественные опухоли у новорожденных хомячков и трансформацию клеток, культивируемых in vitro, но не вызывают опухолей у естественных хозяев.
Аденовирусы птиц серотипа 11 вызывают геморрагический энтерит индюков и мраморную болезнь селезенки фазанов, а серотипа 8 — острый вирусный гепатит цыплят.
Аденовирусы представляют собой частицы кубической симметрии диаметром 70-100 нм. Вирионы содержат ДНК (13% массы) и белок (87% массы), не имеют оболочки, липидов и содержат следовые количества углеводов в белке отростка, модифицированном включением глюкозамина. Вирионы имеют белковое покрытие, окружающее ДНК-содержащую сердцевину. Белковое покрытие (капсид) состоит из 252 субъединиц (капсомеров), из которых 240 гексонов и 12 пентонов. В структуре вириона содержится, по-видимому, 11 белков (м.м. 2-120 кД). Наружный слой вириона (капсид) содержит 7 белков. В сердцевине вириона находятся 4 белка (в том числе концевой белок 55 кД), который ковалентно связан с 5'-концами вирусной ДНК.
240 гексонов образуют 20 поверхностей в виде равносторонних треугольников. На вершинах икосаэдра расположены 12 капсомеров (пентонов), каждый из которых граничит с пятью соседними невершинными капсомерами (гексонами). От вершин пентонов отходят булавовидные отростки диаметром 2 нм и длиной 20-50 нм. На вершине отростка имеется утолщение диаметром 4 нм. Эти капсомеры вместе с отростками (фибрами) называют пентонами. Сердцевина вириона имеет сферическую форму диаметром 60-65 нм и представляет собой правильно организованную структуру из 12 петель, вершины которых совпадают с вершинами капсида и на срезе вириона образуют фигуру, подобную цветку. Петли образованы ДНК и белками VII и V. В сердцевине находятся также белки VI и X.
Геном аденовирусов представлен одной линейной молекулой двуцепочечной ДНК размером 36-44 тпн с инвертированными концевыми повторами. Вирусный геном кодирует около 40 белков и транскрибируется после сложного сплайсинга РНК. Около 1/3 вирусных белков являются структурными белками. Вирусные частицы присоединяются к клетке рецепторами пентоновых отростков и проникают внутрь ее путем эндоцитоза. Затем удаляется наружный белковый слой (капсид) и сердцевина вириона (вирусный геном и связанные с ним гистоны) проникает в ядро клетки, где происходит полный цикл репликации вируса от транскрипции мРНК до образования зрелых вирионов. В ядре клетки вирусный геном транскрибируется клеточной полимеразой II, в соответствии с комплексной программой, закодированной в обеих цепях вирусной ДНК. В результате образуется 5 продуктов ранней (Е) транскрипции: Е1 А, Е1 В, Е2, ЕЗ и Е4, два - промежуточной: IX и IVa2 и один - поздней (L) транскрипции. На матрице последнего из них транскрибируется семейство из 5 поздних мРНК (L1-L5). Все ранние кодирующие области вирусного генома транскрибируются от отдельных промоторов, тогда как поздние области от одного - главного позднего промотора. Ранние мРНК транслируются в ранние белки, которые изменяют клеточный цикл, блокируют клеточный защитный механизм, выключают транспорт мРНК и участвуют в репликации вирусной ДНК.
Вирусная ДНК реплицируется, используя 5'-концевой белок 55кД в качестве праймера, и продолжается от обоих концов с помощью замещающего механизма. Вслед за репликацией ДНК транскрибируются поздние мРНК, которые затем транслируются в структурные белки в избыточном количестве. Первичные транскрипты имеют размер около 29 kb; по крайней мере 18 мРНК образуются альтернативным сплайсингом поздних первичных транскриптов. Во второй половине репликативного цикла вируса происходит остановка макромолекулярного синтеза клетки. Вирионы формируются в ядре, где они образуют кристаллоподобные скопления. Продукты трансляции поздних мРНК участвуют в сборке вирионов и лизисе клеток. Продукты генов Е1А и Е1В ответственны за клеточную трансформацию.
Область ЕЗ несущественна для репликации аденовируса in vitro и может быть использована для вставки чужеродной ДНК при конструировании аденовирусных векторов и рекомбинантных вакцин.
Основные структурные белки аденовирусов представлены в таблице. Полипептид II с молекулярной массой 120 кД входит в состав гексонов, причем в каждом из них содержится три молекулы этого белка. Таким образом, 240 гексоно-вых капсомеров вириона содержат 720 молекул белка II. Гексонные белки составляют основную массу (53%) вирионных белков.
Основание пентона содержит пять молекул полипептида III, его отросток — три молекулы полипептида IV, то есть всего соответственно по 60 и 36 копий на вирион. Отросток вместе с основанием пентона формируют комплекс пентона. Основная роль в антигенной активности аденовирусов принадлежит гексонам, пентонам и их отросткам.
В структуре гексона обнаружены две антигенные детерминанты: группоспецифическая (а) и типоспецифическая (е). Антитела против очищенных гексонов нейтрализуют инфекционность вируса данного серотипа.
Многие аденовирусы обладают гемагглютинирующими свойствами. Верхушки пентоновых отростков присоединяются к рецепторам клеток и соединяют их между собой. Антигенная детерминанта отростка пентона, по-видимому, идентична типоспецифическому гемагглютинину
Вирусы внутри рода различают на основе антигенных и геномных характеристик. При идентификации вирусных штаммов используют рестрикци-онное эндонуклеазное картирование и секвенирование геномной ДНК.
Родоспецифические эпитопы расположены на пентонах, т.е. структурных единицах, расположенных на поверхности капсида. Типоспецифические антигены, которые идентифицированы в реакциях нейтрализации и РТГА, находятся на поверхности гексонов. Пентоновые отростки содержат другие типоспецифические эпитопы, которые также играют важную роль в нейтрализации. Хотя утолщения на пентоновых отростках содержат лиганды, ответственные за прикрепление вируса к специфическим клеточным рецепторам, антитела к ним играют лишь слабую роль в нейтрализации вируса. Серологическая структуризация семейства в основном основана на относительной доминантности некоторых эпитопов в серологических тестах, нежели на их расположении в вирионах.
За индукцию типоспецифических ВН антител ответственны аминокислотные последовательности 393—398 и 536—547 белка гексона. Пептид, образуемый аминокислотными остатками 20—35 белка гексона, обладает комплементсвязывающей активностью. Антитела к гексону и отростку пентона обладают нейтрализующей способностью. Смесь этих антител нейтрализует вирус при меньшей концентрации. Отмечено участие в нейтрализации инфекционности аденовируса антител к гексонам гетерологичных типов вируса. Комплемент усиливает действие ВН-антител. Антитела к гексоновым и фиберным белкам нейтрализуют инфекционность и ассоциированы с устойчивостью организма к инфекции. В составе аденовируса человека различают четыре комплементсвязывающих антигена (КСА), которые обозначают буквами А, В, С и Р. А-антиген связан с гексоном, В-антиген — с основанием пентона, С-антиген — с отростками (пептона), Р-антиген является внутренним антигеном. А- и Р-антигены — группоспецифические комплементсвязывающие антигены, общие для всех аденовирусов человека. По В-антигену все аденовирусы человека разделены на три подгруппы. С-антиген — типоспецифическии комплементсвязывающии антиген. В опытах на животных установлена иммуногенность вакцин, полученных из очищенных гексонов и отростков пентонов. Однако вакцины из капсидных белков аденовирусов обладают более низкой иммуногенностью, чем цельновирионные вакцины. Иммуногенность белков гексонов и отростков пентонов значительно повышалась после их включения в состав липосом.
Аденовирусы интенсивно использовали в качестве векторов для введения чужеродных ДНК различных вирусов. Экспрессия чужеродных вирусных генов в рекомбинантных аденовирусных векторах была продемонстрирована на многочисленных примерах. Таким образом были экспрессированы гликопротеин Д вируса болезни Ауески, гликопротеин 340/220 вируса Эпштейн-Барр, структур ный гликопротеин вируса везикулярного стоматита, белок VP4 ротавируса, гликопротеин вируса бешенства, гликопротеин вируса парагриппа-3, гликопротеин оболочки вируса иммунодефицита кошек, гликопротеин вируса респираторного и репродуктивного синдрома свиней, поверхностный антиген вируса гепатита В человека, Т-антиген вируса полиомы и белок слияния вируса кори.
