Подсчет количества сперматозоидов в семенной жидкости — важнейший компонент базового анализа спермы. Концентрация сперматозоидов — количество сперматозоидов на единицу объема семенной жидкости. Обычно этот показатель выражают в миллионах сперматозоидов на миллилитр (млн/мл). Концентрация сперматозоидов сама по себе не отражает общего количества сперматозоидов в эякуляте. Число сперматозоидов подсчитывают с учетом концентрации и объема эякулята.
Разработано два метода определения концентрации спермы. Оба включают подсчет определенного количества разжиженной спермы в специальном резервуаре. Независимо от выбранного метода, необходимо удостовериться, что образец спермы хорошо перемешан. Для этого контейнер осторожно взбалтывают, однако не следует энергично встряхивать сосуд.
Концентрацию сперматозоидов в образце можно определить методом Нейбауэра с использованием гемоцитометра. Гемоцитометр Нейбауэра — один из специально разработанных резервуаров для подсчета, применяемых на данный момент. С помощью нагнетательной пипетки оба резервуара наполняют хорошо перемешанной разбавленной спермой. Резервуар оставляют на 5 мин для оседания клеток. Подсчитывают только отдельные сперматозоиды на сетке. Изолированные головки, хвосты и другие клетки зародышевой линии должны быть отмечены, но их не подсчитывают. После подсчета сперматозоидов с одной стороны резервуара производят подсчет на второй решетке. Затем находят среднее значение.
Если отдельные значения отличаются от среднего более чем на 5%, следует провести тест повторно. Если оба полученных при подсчете значения засчитываются, среднее значение делят на вычисленную площадь поверхности и умножают на коэффициент разбавления, таким образом находят концентрацию сперматозоидов в первоначальном образце спермы (млн/мл). Затем можно подсчитать количество сперматозоидов, умножив значение концентрации сперматозоидов на объем эякулята.
Счетная камера Маклера (Sefi Medical Instruments, Haifa, Israel) — специальный прибор, разработанный для быстрого анализа спермы. С момента изобретения в 1980 г. счетная камера Маклера получила широкое распространение и используется теперь во многих лабораториях. Главное преимущество камеры Маклера перед гемоцитометром Нейбауэра — отсутствие необходимости разбавлять образец спермы (за исключением случаев крайне высокой концентрации). Кроме того, подвижность и прогрессивно-поступательное движение можно оценивать во время вычисления концентрации сперматозоидов.
Хотя камера Маклера упрощает определение концентрации при анализе спермы, данный метод уступает традиционной гемоцитометрии в точности и имеет тенденцию к получению ошибочных результатов.
Понятие «-зооспермия» относится к наличию сперматозоидов в эякуляте. Пациентов с концентрацией сперматозоидов менее 20х106/мл классифицируют как страдающих олигозооспермией. Азооспермия — полное отсутствие сперматозоидов в эякуляте. Диагноз азооспермии ставят лишь после микроскопического подтверждения отсутствия сперматозоидов в осадке после центрифугирования неразбавленного образца спермы.
Подвижность сперматозоидов и их прогрессивно-поступательное движение
Хотя общее количество подвижных сперматозоидов — важный показатель потенциала фертильности, качество движения сперматозоидов тоже необходимо оценивать. Обычно регистрируют как количественные, так и качественные показатели спермы. Анализ подвижности и способности продвигаться вперед следует проводить в течение 1-2 ч с момента получения эякулята. Необходимо содержать образец при комнатной температуре, чтобы подвижность сперматозоидов не снизилась.
При количественном анализе рассматривают не менее 200 сперматозоидов в пяти отдельных областях. Их классифицируют как проявляющие нормальное движение, аномальное движение или не проявляющие движения. Подвижность подсчитывают как процент сперматозоидов, демонстрирующих жгутиковое движение, по сравнению с их общим количеством. В дополнение к количественному анализу для оценки прогрессивного характера движения сперматозоидов применяют несколько классификационных систем. Некоторые из них оценивают продвижение отдельных сперматозоидов и подсчитывают их отдельно; другие рассматривают прогрессирующее движение как модальный компонент подвижных сперматозоидов.
Система классификации ВОЗ за 1999 г. выделяет четыре категории сперматозоидов:
• категория А включает сперматозоиды с быстрым прогрессирующим движением;
• к категории В относят медленные или инертные сперматозоиды;
• категория С — сперматозоиды с непрогрессирующим движением;
• категория D — неподвижные сперматозоиды.
Процентное соотношение категорий сперматозоидов регистрируют. В нормальном образце спермы содержится, по меньшей мере, 50% подвижных сперматозоидов, у большинства из них наблюдают хорошее прогрессирующее движение (модальный класс >2, классы А и В ВОЗ). Астенозооспермию диагностируют при количестве сперматозоидов с хорошей подвижностью менее 50%.
