Лейкоциты под действием цитостатиков и иммуномодуляторов. Цитотоксичность NK-клеток под влиянием цитостатиков
Учитывая результаты предыдущих экспериментов, вскрывающих механизм усиления цитотоксичности МЛ при комбинации цитостатика с иммуномодуляторами в отношении опухолевых клеток, интерес представляло изучение комбинированного влияния ИММП и TNF-a на цитотоксический потенциал МЛ селезенки мышей по отношению KTNF-чувствительной линии мышиной фибросаркомы L929.
Соотношение клетки-мишени/клетки-эффекторы на основании предварительных исследований было выбрано как эффективное 1:5. Клетки-мишени и эффекторы культивировали в присутствии различных концентраций иммуномодуляторов и TNF-a. Цитотоксическую активность МЛ определяли с помощью МТТ-теста.
В присутствии TNF-a, ВП-4, ГМДП практически во всех исследованных концентрациях, а также АСО при добавлении 1,5 ЕС/мл усиливали цитотоксичность МЛ по отношению к клеткам L929 по сравнению с контролем 1.
Клетки фибросаркомы проявляли высокую чувствительность к МЛ при коинкубации с TNF-a и иммуномодуляторами (ГМДП и Иммуновак-ВП-4). Цитотоксичность МЛ в присутствии АСО в дозе 1,5 ЕС/мл практически не уступала, а иногда даже была выше, чем при инкубации Иммуновак-ВП-4 и ГМДП в концентрации 1 мкг/мл.
Было также изучено потенциирующее влияние ИММП на цитотоксичность МЛ селезенок мышей линии СВА по отношению к клеткам мышиной фибросаркомы L929 при коинкубации МЛ с цитостатиками и иммуномодуляторами с последующим внесением в культуру TNF-a. Сначала эффекторы инкубировали в присутствии цитоста-тиков и иммуномодуляторов при 37°С в течение 48 часов, затем МЛ многократно отмывали средой RPMI-1640 от цитостатиков и ИММП.
Далее клетки культивировали в течение суток при соотношении мишени/ эффекторы 1:5 с внесением в культуральную среду TNF-a.
В качестве цитостатиков в этом эксперименте использовали невысокие концентрации дактиномицина (1,0 мкг/мл) и платинола (0,5 мкг/мл), которые несущественно влияли на цитотоксичность МЛ мышей. Дактиномицин — антибиотик группы актиномицинов из продуктов жизнедеятельности S. parvullus и других актиномицетов. Он обладает противоопухолевой активностью. В ее основе лежит подавление ДНК-зависимого синтеза РНК.
Дактиномицин можно использовать в комбинированной химиотерапии вместе с другими препаратами (например, циклофосфаном) и лучевой терапией.
Все иммуномодуляторы усиливали цитотоксичность МЛ с 9,7 до 27,3% — Иммуновак-ВП-4, 23,5 % — ГМДП и 28% — АСО. Прибавление TNF-a резко меняло показатели. МЛ в присутствии TNF-a обладали высокой цитотоксичностью (46,9±4,0%). Использование TNF-a в комбинации с Иммуновак-ВП-4 приводило к повышению показателя до 82,2±4,1%, с ГМДП — до 79,9±2,8%, с АСО — до 64,8±2,7%.
Культивирование МЛ с цитостатиками увеличивало эти значения при комбинациях, содержащих Иммуновак-ВП-4 и ГМДП — до 87,7-96,3%, при АСО — до 56,3-76,7%. Преимущество имел платинол, так как в системе МЛ+ГМДП+TNF-a и МЛ+ВП-4+TNFa он обеспечил цитотоксичность МЛ равную 96,0 и 95 % соответственно, с АСО — 76,2%, цитотоксичность МЛ в присутствии дактиномицина в этих же условиях составила 87,7, 96,3 и 56,3% соответственно.
Таким образом, в представленных экспериментах отмечалось потенцирующее влияние иммуномодуляторов на цитотоксичность МЛ селезенок мышей линии СВА по отношению к клеткам мышиной фибросаркомы L929 при коинкубации МЛ с цитостатиками и иммуномодуляторами с последующим внесением в культуру TNF-a.
При этом цитотоксичность МЛ, сформированная под воздействием АСО в комбинации с TNF-a и платинолом, уступала в 1,25 раза, а дактиномицином в 1,6 раза — активирующему действию Иммуновак-ВП-4 и ГМДП. Активность МЛ при действии АСО в присутствии TNF-a тоже возрастала и существенно отличалась от контроля.
Полученные данные свидетельствуют о том, что рациональное сочетание химиопрепаратов и ИММП может быть использовано для проведения иммунокоррекции нарушений иммунного статуса у онкологических больных при проведении химиотерапии. Профилактическая противоопухолевая активность ИММП, установленная на модели индукции метастазов, свидетельствует о целесообразности применения ИММП после проведения хирургических радикальных операций и лекарственного лечения больных с целью восстановления иммунитета и продления безрецидивного периода жизни.
