Влияние фенотипа на тяжелые цепи антител. Ограничение V-генов
Использование флуоресцирующих антител показало, что часто на отдельных В-клетках обнаруживаются лишь иммуноглобулины одного класса и подкласса. Однако как те же самые, так и другие исследователи при помощи сходных методов выявляли присутствие на поверхности одной клетки иммуноглобулинов (например, u и у или u и б), контролируемых разными Сн-генами. Значительная часть лимфоцитов переферической крови людей синтезирует одновременно IgM- и IgD-рецепторы (Rowe е. а., 1973).
В лимфатических органах наряду с клетками, синтезирующими лишь один иммуноглобулин, всегда присутствует немного клеток, каждая из которых синтезирует продукты двух или даже трех Сн-генов.
Синтез одной клеткой продуктов различных Сн-генов наблюдался при изучении секреции антител одиночными клетками. Оказалось, что наряду с клетками, секретирующими антитела только IgM или только IgD, существуют и клетки (1,5% от всех антителообразующих), которые одновременно секретируют оба эти антитела (Nossal е. а., 1971).
Антитела IgG и IgM синтезировали одновременно 16% клонов АОК, образовавшихся в микрокультурах селезонок мыши.
Изучение синтеза иммуноглобулинов отдельными линиями нормальных и опухолевых В-клеток показало, что наряду с линиями, синтезирующими один Сн-продукт, существуют линии, синтезирующие продукты двух и даже трех Сн-генов (Tanigaki, 1966). Хотя приведенные факты указывают на возможность синтеза В-клеткой продуктов нескольких Сн-генов, на определенной стадии дифференцировки отдельные В-клетки обычно синтезируют лишь один из этих продуктов.
Многими авторами показано, что в процессе дифференцировки клона В-клеток они переключаются с синтеза одного Сн-продукта на синтез другого (Preud'homme, Clauvel, 1975). По-видимому, первым иммуноглобулином, который начинает синтезироваться В-клетками является тяжелая цепь, входящая в IgM, IgD. Затем появляются клетки, синтезирующие как эту цепь (сигма), так и цепь, входящую в состав IgM (мю-цепь), и, наконец, клетки, синтезирующие все остальные варианты иммуноглобулинов.
Обнаружение антигенных детерминант, локализованных в V-областях полипептидных цепей (идиотипические детерминанты), сильно расширило возможность изучения экспресии V-генов. Использование антител против идиотипическпх детерминантов, позволяющих идентифицировать V-области, в ряде случаев показало, что тяжелые цепи, синтезированные одной клеткой, могут различаться по С-области (например, быть гамма-и мю-цепями), но быть идентичными по V-области.
Так, на многих лимфоцитах присутствуют одновременно продукты С- и Сu-генов. Однако оба эти продукта идентичны по идиотипической специфичности, т. е. идентичны по V-области (Fu е. а., 1975).
Образование антифосфорилхолиновых антител, относящихся к разным классам (IgA, IgM и IgGl), но идентичных по идиотипу, было показано у мышей (Gearhart е. а., 1975).
Особо убедительны опыты, в которых экспрессия как аллельных, так и неаллельных V-генов изучалась генетическими методами. В результате этих исследований было выявлено наличие VH-генa, контролирующего у мышей C57BL/6 определенный идиотип (VHHO), обнаруживаемый в антителах против 4-окси-З-нитро-фенилуксусной кислоты (НФ). Этот ген отсутствует у мышей СВА. Если гибриды этих двух линий (C57BL/6xCBA)F иммунизировать НФ, то отдельные особи образуют либо антитела, несущие изучаемый идиотип (92% особей), либо антитела, лишенные его (8% особей). Лишь очень немногие мыши синтезировали антитела, несущие продукт обоих аллельных VH-генов (Julin е. а., 1976).
Еще более четко наличие жесткого фенотипического ограничения было доказано у кроликов. Генетический анализ показал, что у этих животных существует по меньшей мере три локуса (а, х, у), контролирующих основную структуру вариабельной области тяжелых цепей. У кроликов, гомозиготных по двум неаллельным генам (а1 и у33), иммунофлуоресцентным методом было изучено более 30 000 В-лимфоцитов. Ни на одном из них не удалось выявить одновременного присутствия продуктов обоих этих V-генов.
