МедУнивер - MedUniver.com Все разделы сайта Видео по медицине Книги по медицине Форум консультаций врачей  
Рекомендуем:
Физиология человека:
Физиология
Физиология клетки
Физиология эндокринной системы
Физиология пищеварительной системы
Физиология клеток крови
Физиология обмена веществ, питания
Физиология почек, КЩС, солевого обмена
Физиология репродуктивной функции
Физиология органов чувств
Физиология нервной системы
Физиология иммунной системы
Физиология кровообращения
Физиология дыхания
Физиология водолазов, дайверов
Видео по физиологии
Книги по физиологии
Форум
 

Преципитат иммунных комплексов. Взаимодействие доменов в цепях антител

Состояние агрегации иммунных комплексов не должно препятствовать фиксации на Fc-фрагменте компонентов комплемента и, следовательно, их диффузии в преципитате. Изучение структуры специфического преципитата антител с антигенами было проведено с помощью спиновых меток (Григорян и др., 1969). Для мечения белка использовали нитроксильный радикал, синтезированный на базе малеинимида. Он ковалентно реагировал с SH-группами кроличьих антител после восстановления 2-меркаптоэтанолом межцепочечных дисульфидных связей. При этом активность антител сохранялась.

В результате преципитации спин-меченых антител яичным альбумином метка продолжала вращаться свободно, не испытывая стерических препятствий. С другой стороны, неспецифическое осаждение спин-меченых антител сульфатом аммония приводило к сильной иммобилизации метки. Эти данные указывают на решетчатую, рыхлую структуру преципитата, образованного иммунными комплексами.

В опытах с применением метода кругового дихроизма были обнаружены различия в спектрах трех гомологичных антипневмококковых антител до и после их взаимодействия со специфичными гексасахаридны-ми лигандами (Jaton е. а., 1975а). Исследовали также изменения в спектрах гомологичных и гибридных рекомбинантов Н- и L-цепей под действием гаптена. Гомологичные рекомбинантные антитела имели спектр, идентичный спектру нативных антител, несмотря на отсутствие межцепьевых S—S-связей.

Изменения в спектрах происходят при связывании гаптена во всех трех нативных антителах, их Fab-фрагментах и в гомологичных рекомбинантных молекулах. Однако не было обнаружено никаких признаков конформационных изменений после взаимодействия гаптена с гетсрологичными рекомбинантными антителами. Эти результаты подтверждаются изменением квантового выхода флуоресценции антител. Они указывают на высокую специфичность межцепьевых взаимодействий в иммуноглобулинах.

иммунные преципитаты

Уникальную информацию о взаимодействии доменов в цепях можно получать методом спиновой метки. Эта информация зависит от участка ее связывания белком. Соответствующий аминокислотный остаток (или остатки), с которым происходит связывание метки, определяется ее химической структурой и условиями мечения (например, рН). В нашей работе (Kaivarainen, Nezlin, 1967a) белки метили двумя иминоксильными радикалами: 2,2,6,6-тетраметил-4-амино-(N-дихлортриазином) — R, и имидозолидом (2,2,5,5-тетраметил-1-оксилпироллин-4-карбоновая кислота) — R2. В зависимости от условий присоединения меток они могли связываться с остатками лизина или гистидина.

Спектр ЭПР меток R, и R2 конъюгированных, вероятнее всего, с ли-зиновыми остатками белков, представлял собой три узкие линии, характерные для слабо иммобизированной метки, не испытывающей стери-ческих препятствий со стороны макромолекулы. В отличие от этих спектров спектры ЭПР иммуноглобулинов G, меченных по R, (предположительно присоединяющихся к гистидиновым остаткам), состоят из пяти компонент.
Такие спектры указывают на способность метки находиться в двух различных микроокружениях — А и В, различающихся по микровязкости.

Сходство формы спектров ЭПР различных IgG и их субъединиц, по-видимому, обусловлено общими для всех них структурными элементами, а именно, доменами, и их взаимодействием. Это предположение подтверждается тем, что у изолированных протеолизом доменов L-цепей, А-компоненты спектра, соответствующие более иммобилизованному состоянию метки, полностью исчезают. При этом важно отметить, что по данным физико-химических и иммунохимических методов половины L-цепей (домены) сохраняют свою основную пространственную структуру, свойственную им в составе интактных L-цепей.

В опытах по изучению взаимодействия спин-меченных Rt по гистидиновым остаткам антител с антигенами использовали выделенные кроличьи антитела против гемоглобина человека, против IgG быка и ослиные антитела против LgG человека. В условиях нашего эксперимента спиновые метки связывались в основном с Fab-фрагментами. Характер изменений спектров ЭПР спин-меченых антител при взаимодействии с антигенами не зависел от того, образовывался преципитат или нет.

Во всех исследованных случаях комплексообразование спин-меченых антител с антигенами приводило к увеличению отношения площади А-компонент к площади центральной компоненты по сравнению с контрольным спектром ЭПР. Кроме того, происходил сдвиг А-компонент, соответствующий увеличению иммобилизации метки в А-состоянии. Поскольку площадь А-компонент определяется количеством метки в этом состоянии, то ее увеличение означает увеличение количества метки в А-состоянии или увеличение времени жизни этого состояния.

- Также рекомендуем "Конформенная модель иммунных комплексов. Взаимодействие антител с антигенами"

Оглавление темы "Особенности формирования иммунных комплексов":
1. Метод поляризации флюоресценции антител. Корреляция иммуноглобулинов
2. Гибкость иммуноглобулинов G и Е. Типы гибкости иммуноглобулинов
3. Изменения молекул антитела. Конформация иммуноглобулинов
4. Модификация антитела после взаимодействия с антигеном. Комплементсвязывающие центры
5. Преципитат иммунных комплексов. Взаимодействие доменов в цепях антител
6. Конформенная модель иммунных комплексов. Взаимодействие антител с антигенами
7. Стабилизация иммуноглобулинов гаптенами. Зависимость конформации антител от температуры
8. Ассоциация иммунных комплексов. Механизмы диссоциации комплекса антитело-антиген
9. Антигенность иммуноглобулинов. Антигенные детерминанты антител
10. Внутривидовые различия иммуноглобулинов. Аллотипы антител
Медунивер Мы в Telegram Мы в YouTube Мы в VK Форум консультаций врачей Контакты, реклама
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.