Проблемы инактивации вирусов. Пути разрешения проблем при физической инактивации вирусов.
Следует отметить, что наряду с очевидными достижениями в области инактивированных вирусных вакцин иммуногенность ряда препаратов отвечает лишь минимальным требованиям, а при некоторых заболеваниях (корь, респираторно-синцитиальная инфекция) вообще не удалось получить сколько-нибудь выраженного протективного эффекта за счет применения этого класса препаратов. Объясняется это тем, что во многих случаях трудно достичь сочетания гарантированной безопасности и высокой эффективности.
Это относится, прежде всего, к вакцинам против особо опасных возбудителей, при изготовлении которых приоритет отдается безопасности, даже если это идет в ущерб эффективности. Например, вирус гепатита А в культуральной среде в присутствии формалина (1:4000) не выявляли через 97 ч инкубации при 35°С. Однако для полной гарантии инактивации вируса его инкубировали при указанных условиях в течение 10 дней. При изготовлении вакцин против других особо опасных заболеваний продолжительность инактивации вируса обычно превышает минимальную в 2 и более раз, что, естественно, сказывается на снижении их иммуногенности.
Возникающие трудности удается в значительной мере преодолеть, если для изготовления инактивированной вакцины используют аттенуированные штаммы вируса. Это обстоятельство позволяет несколько ослабить режим инактивации вируса без существенного риска уменьшения безопасности препарата. Классическим примером такого решения может служить изготовление многочисленных инактивированных вакцин против бешенства из аттенуированных штаммов вируса. Даже полностью авирулентный для мышей штамм (TAG-1) вируса бешенства оказался в равной мере пригодным для изготовления живой и инактивированной вакцин. Показана возможность приготовления инактивированной вакцины из аттенуированных штаммов полиовируса, сравнимой по иммуногенности с вакциной из вирулентных штаммов. В нашей лаборатории получены иммуногенные инактивированные препараты из аттенуированных вакцинных штаммов вирусов болезни Ауески, катаральной лихорадки овец и других сложноустроенных вирусов.
Анализ приведенных данных показывает, что, несмотря на то, что основные принципы контроля инактивированных вакцин на авирулентность одинаковы, методы испытания конкретных вакцин могут существенно отличаться. Индивидуальный подход определяется свойствами вируса, особенностями болезни, чувствительностью биологических моделей. Наиболее универсальным и общепризнанным методом является испытание инактивированных препаратов в чувствительных культурах клеток. Однако при оценке безопасности некоторых вакцин пользуются сложным комплексным подходом.
Анализируя сказанное, можно заключить, что одной из проблем получения инактивированных вакцин является изыскание безупречного способа инактивации вирусов, обеспечивающего необратимое повреждение его репликативного механизма при полном сохранении исходной антигенной структуры. Поскольку решить эту задачу во многих случаях пока не удалось, иммуногенность инактивированных вакцин повышают за счет использования концентрированных вирусных суспензий и адъювантов. Для приготовления инактивированных вакцин против различных заболеваний применяют химические методы инактивации вирусов. Внимание исследователей к формальдегиду по-прежнему не ослабевает; несмотря на недостаточную иммуногенность формолвакцин против некоторых инфекций, существует необходимость изыскивать новые методы инактивации, позволяющие полностью подавлять инфекционность вирусов без существенного изменения антигенных свойств вакцин. Перспективным является использование азиридинов, глютаральдегида и бета-пропиолактона, а также применение нетрадиционных способов инактивации вирусов.
Физические методы инактивации из-за трудности контролируемого дозирования особенно при крупномасштабном производстве пока не получили практического применения. С помощью химических методов можно приготовить вакцины почти из любого вируса, однако они могут сильно различаться по иммуногенности. Причина такого разнообразия пока недостаточно ясна. В одних случаях это может быть следствием повреждающего и денатурирующего действия инактивирующих агентов на вирусные антигены, в других - слабой антигенности вируса, когда даже естественное переболевание не сопровождается образованием выраженного иммунитета.
В повышении иммуногенности инактивированных вакцин важная роль принадлежит адъювантам. Несмотря на крупные успехи в создании инактивированных вакцин, многие из них пока не обеспечивают такой напряженной и длительной защиты, как живые. Несмотря на это, против некоторых болезней созданы достаточно эффективные инактивированные вирусные вакцины, являющиеся на сегодня единственно приемлемыми препаратами для специфической профилактики.
Иммуногенность инактивированной вакцины в значительной степени зависит от наличия и вида адъюванта. Включение ГОА в состав вакцин увеличило их активность во много раз. В вакцинах для человека в качестве адъюванта используют только ГОА. В вакцинах для животных используют различные адъюванты. Для крупного и мелкого рогатого скота в качестве адъюванта чаще применяют ГОА с сапонином. Для свиней чаще применяют эмульгированные вакцины. Эмульгированные моно- и поливалентные вакцины оказались более иммуногенными не только для свиней, но и для крупного рогатого скота.
Вакцины с масляным адъювантом создавали у телят более выраженный и продолжительный иммунитет, чем ГОА-вакцина. У 1-месячных телят с колостральным иммунитетом отсутствовал иммунный ответ на введение водных антигенов, тогда как аналогичные телята, привитые вакциной с масляным адъювантом, реагировали иммунологически так, как взрослые животные.
Иммуногенность инактивированных вакцин для птиц подобным образом зависит от вида адъюванта.
