Лейкемия кошек проявляется в основном развитием лейкемии с образованием лимфом и фибросарком в результате вирусной трансформации лимфоретикулярных и, реже, гематопоэтических клеток. Заболевание является следствием иммуносупрессии и всегда протекает прогрессивно, то есть без обратного развития. Возбудитель ЛК относится к ретровирусам и, в частности, к экзогенным онкорнавирусам кошек. Вирус ЛК широко распространен в популяции кошек и может передаваться горизонтально.
В мире инфицированы приблизительно 5—10% кошек. Главным источником распространения вируса является инфицированная слюна, в 1 мл которой может содержаться 5х103—2х106 вирусных частиц. Более половины инфицированных кошек погибают от вторичных инфекций, в результате иммунодефицита, а не от неопластической болезни. Основная масса (85%) инфицированных кошек погибают в возрасте 3,5 лет. Поражая гемолимфо-ретикулярные клетки, вирус часто вызывает форму СПИД кошек. Обработка культуры клеток костного мозга больных животных кортикостероидами ведет к реактивации латентной инфекции.
Вирусы лейкемии кошек подразделяют на 3 субгруппы: А, В и С. Вирус субгруппы А является экотропным прототипным вирусом, передающимся горизонтально, и связан с длительно латентно-развивающейся лимфомой. Вирусы субгруппы В и С всегда присутствуют в ассоциации с вирусом ЛК-А (соответственно в 50 и 1% случаев). Субгруппа ВЛК-В является генетическими рекомбинантами гена env ВЛК-А и эндогенных провирусных элементов. Эндогенный ВЛК, хотя подобен ВЛК-А по структуре генома, но никогда не экспедировался как инфекционный вирус. ВЛК-С в сочетании с ВЛК-А вызывает летальную анемию, подобную эритроциторной аплазии человека.
Как и все ретровирусы типа С, вирус лейкемии кошек состоит из трех структурных единиц: нуклеокапсида, сердцевины и оболочки. Нуклеокапсид представлен двумя молекулами (+) оцРНК и тремя кодированными gag-геном белками: р10, р15С и р27. Три белка формируют оболочку, окружающую нуклеопротеин (РНК и несколько копий ревертазы). Оболочка нуклеокапсида затем окружается кислым белком р12, кодируемым также gag-геном. Оболочка вириона, образованная мембраной клетки при почковании вириона, содержит два env-генных продукта: gp70 в качестве основного и gpl5E в качестве минорного компонента. Gpl5E является мембранным белком, который способствует трансмембранным отросткам закрепляться в липидном бислое. Gp70 образует выступы, связывающие 15Е «реснички» бисульфидными связями.
Зависимость активации латентной инфекции от активности нейтрализующих антител, а также возможность латентного инфицирования вирусом лейкемии кошек без развития лейкоза у кошек, но с формированием выраженного иммунитета, явились основанием для разработки средств специфической профилактики.
Котят вакцинировали живым и инактивированным формалином вирус лейкемии кошек, выделенным из лимфобластоидной линии клеток FL74, а также инактивированными формалином клетками FL74. Линия клеток FL74 получена от кошки с Т-клеточным лейкозом. Она продуцирует подтипы А, В и С ВЛК и комплекс вирусного антигена, ассоциированного с мембранами клеток (FOSMA).
Инактивированные препараты не предотвращали заражения котят вирулентным вирусом, хотя снижали заболеваемость, несмотря на отсутствие нейтрализующих антител. Живая вакцина оказалась безопасной и эффективной. У половины вакцинированных котят вакцинный вирус обнаружен в костном мозге со 2-й по 4-ю неделю, но отсутствовал в периферической крови и не выделялся со слюной, мочой и калом. Он не передавался горизонтально невакцинированным котятам. В течение нескольких месяцев у вакцинированных котят не выявлено никаких нарушений, а в сыворотке крови обнаружен высокий уровень связанного с ВЛК мембранного антигена и ВН-антител. Вакцинированные котята оказались устойчивыми к заражению вирулентным штаммом вируса.
В другом исследовании вакцина, приготовленная из клеток FL74, обработанных формалином, защищала котят против виремии и образования опухолей. Оказалось, что для развития напряженного иммунитета необходимы три внутримышечные инъекции препарата. Ежегодная ревакцинация обеспечивала поддержание напряженного иммунитета.
Вакцинация кошек оболочечными гликопротеинами вируса лейкемии кошек (gp 70/85) сопровождалась образованием антител, выявляемых в ИФА, но не в реакции нейтрализации. При заражении вакцинированных котят ВЛК наблюдали персистентную вирусемию. Инактивированная цельновирионная вакцина имела более выраженное протективное действие при контрольном заражении котят ВЛК. Протективные свойства цельновирионной вакцины не были связаны с образованием ВН-антител, хотя вакцинация сопровождалась выработкой антител, выявляемых в ИФА, как против вирионов, так и их гликопротеинов. Следует отметить, что оба препарата обнаружили аналогичное, хотя и менее выраженное защитное действие при заражении вакцинированных котят вирусом саркомы кошек (ВСК). У котят, вакцинированных инактивированным цельновирионным препаратом, развивались опухоли меньшего размера, чем у контрольных, а персистентная виремия встречалась значительно реже. Субъединичная вакцина, приготовленная из клеток FL74 и содержащая, кроме gp 70, другие белки ВЛК, не обладала преимуществами по сравнению с гликопротеиновой вакциной.
Выраженный защитный иммунитет у кошек обеспечивал иммуностимулирующий комплекс (ИСКом), содержащий гликопротеин (gp 70/85) ВЛК, выделенный из клеток линии FL74. При заражении вакцинированных и контрольных котят ВЛК виремия развивалась только у непривитых животных.
Вакцинация кошек с последующей ревакцинацией через 2 и 11 недель субъединичной вакциной против ВЛК (Leucocell), включающей антигены подтипов А, В и С ВЛК, а также мембранный антиген (FOSMA) онкорнавируса кошек, защищает животных от развития инфекции при последующем заражении их вирулентным штаммом ВЛК. Спустя 2—4 года после вакцинации и заражения, еженедельная инъекция животным 7,5 мг/кг метилпреднизалона не вела к реактивации вируса в культуре клеток костного мозга, хотя и индуцировала снижение количества лимфоцитов в крови и антител к gp70 в сыворотке крови. Вакцина Leucocell предотвращала латентную инфекцию ВЛК даже на фоне иммуносупрессии. Она хорошо защищает кошек против персистентной виремии и возникновения опухолей. Компонентная вакцина Leucocell (фирма Норден, США), содержащая атигены ВЛК, выделенные из хронически инфицированной линии клеток FL74 (изолят Каваками), в отличие от живого аттенуированного штамма и инактивированного вирулентного штамма ВЛК, индуцирует иммунный ответ без иммуносупрессии. Вакцина защищает от установления латентной инфекции ВЛК при контакте с больными животными.
Вирус, продуцированный лимфобластоидной линией клеток FL74, обладал исключительно низкой инфекционностью и при использовании в качестве живой вакцины мог защитить вакцинированных кошек от заражения высокопатогенным штаммом ВЛК.
Некоторые инактивированные вакцины создавали иммунитет, защищающий от инфицирования. Сравнение нескольких инактивированных вакцин, приготовленных только из ВЛК-А или из трех субгрупп вируса, не выявило разницы между ними. Наиболее успешной была вакцинация, которая сопровождалась образованием ВНА, индуцированными главным образом gp70, и сопровождающаяся протективным иммунитетом. Трансформированные ВЛК клетки FL74 секретировали вирусные полипептиды, включая gpl7 и gp70. Иммуногенность инактивированных вакцин определялась концентрацией gp70 и его нативностью.
В последнее время разработаны два вида рекомбинантных вакцин, которые обеспечивают полную или почти полную защиту кошек от лейкоза. Один из полезных рекомбинантов получен клонированием гена gp70 FeLV-A в плазмидный вектор и экспрессированием в Е. coli MZ-1 под контролем промотора фага лямбда p1. Рекомбинант «gp70» кодировал целый обол очечный белок gp70 и первые 34 аминокислоты трансмембранного белка р15Е. В результате экспрессии образовывался негликозилированный белок 50 кД (р50), который накапливался в E.coli в виде нерастворимых телец включений. Белки (rgp70) растворяли и очищали в присутствии денатурирующих агентов и после добавления ГОА и сапонинового адъюванта (Q521) использовали в качестве вакцины. У кошек, иммунизированных 3 раза, независимо от способа введения развивались выраженный гуморальный иммунитет с образованием ВНА, анти-FOCMA (feline oncorna virus-associated cell membrane antigen) антител и защита от виремии после перитонеального заражения вирусом ЛК-А (105 БОЕ). Широкое применение субъединичной рекомбинантной вакцины в разных странах показало ее высокую эффективность. Она обеспечивала защиту около 100% кошек после двух вакцинаций с интервалом в 21 день. Такая вакцина в Европе получила название Leicogen®, а в США — GenetyVac™ и явилась первой генноинженерной ветеринарной вакциной, имеющей коммерческую ценность.
Эти вакцины практически ареактогенны и безопасны для кошек. Оказалось, что для создания протективного иммунитета антиген gp70 ВЛК может не иметь природную гликозилированную конформацию.
У большинства вакцинированных кошек отмечен низкий уровень ВНА перед заражением и высокий титр ненейтрализующих вирусспецифических антител. У кошек, устойчивых к виремии, через 4 недели после заражения образуются ВНА в высоком титре. Немедленное появление не нейтрализующих антител временно задерживает последующее образование ВНА. Развитие качественного иммунитета и удаление вируса, опосредованного СД8+ Т-клетками, наблюдается при острой инфекции. Использование адъюванта играет важную роль в развитии иммунитета. Неполный адьювант Фрейнда (EFA) оказал относительно слабое влияние на иммуногенность rgp70 для кошек, тогда как сапониновый адъювант QS-21 хорошо усиливал продукцию антител IgG2a, IgG2B и зависящий от Тх клеточный иммунитет.
Рекомбинантные векторные вакцины представляли собой полноразмерные env и gag гены ВЛК-А, клонированные в вирус оспы канареек в качестве вектора. Вирус размножался только в организме птиц, но вызывал полную экспрессию поверхностного гликопротеина и защиту кошек против персистентной вирусемии при двукратном введении 108 БОЕ. Применение векторных вакцин против ЛК показало, что: 1) защита не коррелирует с уровнем ВНА; 2) парентеральное введение рекомбинантной живой вакцины защищает от заражения на слизистые (ороназально); и 3) основную роль в иммунизации играет gp70, a gag ген, вероятно, играет хелперную роль.
