MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Контаминация клеточных культур в вирусологи. Загрязнение культуры с вирусами.

Существенным недостатком клеточных культур, осложняющим их применение, особенно в производстве живых вакцин, является опасность их загрязнения вирусами, бактериями, грибами, дрожжами, микоплазмами и паразитами. При крупносерийном производстве вирусных препаратов загрязнение клеточных культур различными микроорганизмами может встречаться относительно часто. Наиболее трудно выделить контаминацию латентными вирусами, которые длительное время могут оставаться незамеченными в культуре.

Своеобразным видом контаминации является загрязнение клеток одной линии клетками другой. С тех пор как появились культуральные вирусные вакцины, проблемы их изготовления и контроля рассматривались индивидуально и решались по мере выявления.

Обычная практика приготовления культуральных вакцин связана с получением клеточных культур и размножением в них в достаточном количестве вируса. Гарантия чистоты конечного продукта - использование чистых материалов. Материалами, используемыми при производстве вирусных вакцин, с которыми связаны случайные эндогенные загрязнения, являются: исходный клеточный материал, сыворотка, питательная среда, трипсин и посевной вирус. Большинство из них заранее можно проверить на чистоту.

При использовании линий клеток в производстве вирусных препаратов их чистота и безопасность применения также могут быть определены заранее. Труднее контролировать клеточный материал, используемый при изготовлении первичных культур, когда нет времени для оценки чистоты тканевого сырья. Несмотря на возможность длительного хранения свежеизолированных клеток в замороженном состоянии, этим приемом обычно не пользуются при изготовлении первичных культур.

культивирование тогавирусов

Загрязнение бактериями, дрожжами и грибами. Несмотря на применение антибиотиков, бактериальные загрязнения встречаются в большинстве лабораторий. При исследовании 73 клеточных культур из 22 лабораторий наличие бактерий обнаружено в 20 (27%). Среди них идентифицированы коринебактерии, микрококки, бациллы и кишечная палочка. Они не вызывали помутнения культуральной жидкости и не оказывали ЦПД на клетки. Поэтому их обнаружение с использованием специальных методов было неожиданным для исследователей и показало, что контаминация клеточных культур на самом деле широко распространена. Псевдомонады и фекальный щелочеобразователь, в отличие от эшерихий и стафилококков, подобно вирусам могут образовывать «бляшки» в культуре.

Некоторые дрожжи, как и бактерии, могут расти медленно и не оказывать цитопатического эффекта, особенно в присутствии антибиотиков. Плесени растут медленно и во многих случаях могут быть подавлены фунгизоном или нистатином.

С целью уменьшения воздушного загрязнения питательных сред, растворов и культур клеток применяют стерилизацию воздуха.

Стабильные линии клеток при длительном субкультивировании в обычных условиях, как правило, оказываются загрязненными микоплазмами. Основной источник такого загрязнения — сыворотка. В противоположность перевиваемым культурам, для первичных культур загрязнение микоплазмами — весьма редкое явление. В клеточных линиях обнаруживают различные виды микоплазм, которые могут накапливаться в высокой концентрации (>106—107 КОЕ/мл). Контаминация микоплазмами не всегда сопровождается заметными изменениями роста культуры. Микоплазмы клеточных культур в основном относятся к четырем видам: М. orale, M. hyorhinis, M. arginini и М. laidlawii. При контроле живых вакцин следует иметь в виду возможность присутствия вариантов М. hyorhinis, не растущих в бесклеточной среде.

Микоплазмы-контаминанты клеточных культур эффективно (98%) выделяли в коммерческой среде FC с предпочтительным выращиванием в анаэробных условиях. Деконтаминация постоянных линий клеток от микоплазм — весьма трудная задача и крайняя мера, применение которой оправдано лишь при невозможности возврата к неконтаминированной маточной культуре. Многочисленные попытки в этом направлении оканчивались безрезультатно. Обнадеживающие результаты получены при обработке клеток в течение трех недель антибиотиками (тиамулин 10 мкг/мл или моноциклин 5 мкг/мл) с последующим клонированием. После деконтаминации клетки в течение длительного периода наблюдения (75 пассажей) оставались свободными от микоплазм. Клетки удавалось освободить от микоплазм при одновременной обработке моноциклином, антисывороткой и комплементом. При инкубации клеток в течении шести дней с 0,4 мкг/мл квинолона микоплазмы исчезли.

Аналогичные результаты получены от одновременного применения спектриномицина (10 мкг/мл) и линкомицина (20 мкг/мл). Для деконтаминации от микоплазм предложено пассировать клетки на бестимусных мышах. Линию эритролейкемических клеток человека (К-562) удалось освободить от быстрорастущих в анаэробных условиях М. fermentas однократным введением мышам с последующим рекультивированием клеток in vitro.

Культуральные вакцины исследуются на наличие бактерий и грибов на жидких, а также плотных питательных средах в аэробных условиях. Микоплазмы выявляются культуральными и некультуральными методами.

- Читать далее "Вирусная контаминация в вирусологи. Борьба с вирусной контаминацией."


Оглавление темы "Биотехнологии в вирусологии.":
1. Дефектные интерферирующие вирусные частицы. ДИ-частицы вирусов.
2. Типы взаимодействия вирусов с клетками. Особенности воздействия вирусов на клетки.
3. Культивирование вирусов. Биотехнологии в вирусологии.
4. Опасность культивирования вирусов. Осложнения вирусной биотехнологии.
5. Среды для выращивания вирусов. Клеточные субстраты в вирусологии.
6. Постоянная клеточная линия для выращивания вирусов. Непрерывное культивирование вирусов.
7. Виды культур клеток в биотехнологии вирусов. Культуры лимфобластоидных и миеломных клеток.
8. Контаминация клеточных культур в вирусологи. Загрязнение культуры с вирусами.
9. Вирусная контаминация в вирусологи. Борьба с вирусной контаминацией.
10. Проверка клеточной культуры на контаминацию вирусами. Вирусы контаминирующие клеточные культуры.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта