MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Постоянная клеточная линия для выращивания вирусов. Непрерывное культивирование вирусов.

Постоянная (непрерывная) клеточная линия — это клетки, способные субкультивироваться вне организма в течение неограниченного количества пассажей. На уровне знаний о поведении культивируемых клеток невозможно определить точку, когда культура становится стабильной, т. е. приобретает способность расти до бесконечности. Только на основе опыта с фибробластоподобными клетками человека показано, что культура должна субкультивироваться, по крайней мере, 70 раз с интервалом примерно в три дня, прежде чем ее можно будет считать постоянной (непрерывной) линией клеток.

Все культуры с неограниченной способностью к размножению («бессмертные культуры») следует называть постоянными (непрерывными) или стабильными линиями. В вирусологической литературе широко распространен термин «перевиваемые линии клеток», под которым имеются в виду линии клеток, способные к бесконечному росту вне организма.

Под трансформацией клеток подразумевают необратимые генетические изменения, характеризующиеся изменением ростовых свойств культивируемых клеток. Трансформация делает клетки бессмертными и менее зависимыми от питательных факторов и геометрических параметров роста. Изменение ростовых свойств связано с изменением транспортировки питательных веществ через клеточную мембрану и является одной из адаптивных особенностей, позволяющих клеткам размножаться в условиях, неблагоприятных для не трансформированных родительских клеток.

Изменение клеточной мембраны сопровождается потерей поверхностного белка (150 кД) и изменением антигенных свойств. Основное достоинство трансформированных клеток - способность к бесконечному размножению и улучшенные ростовые свойства. Трансформированные клетки могут образовывать опухоли у иммунологически толерантных животных. По этой причине трансформацию иногда неправомерно приравнивают к злокачественным изменениям. Первичные культуры клеток, линии диплоидных и трансформированных клеток получили широкое применение в вирусологической практике и явились основой создания крупномасштабных систем культивирования клеток и производства вакцин.
Это, в свою очередь, потребовало усовершенствования методов культивирования, организации коммерческого производства сред и аппаратуры для культур клеток.

культура клеток щитовидной железы и цитомегаловирус

Получение постоянных линий намного расширило исследования в области клеточной биологии и вирусологии. На их основе появилась возможность получения мутантных и гибридных линий клеток, что открыло перспективу создания новых субстратов, пригодных для культивирования вирусов. Нормальные клетки удается субкультивировать вне организма в течение ограниченного количества пассажей, после чего их размножение прекращается и они, как правило, погибают. Это обычно происходит примерно после 50 генераций, если клетки получены из тканей взрослого организма.

Лишь иногда они способны продолжать размножаться в культуре неограниченно долго, превращаясь в так называемые трансформированные постоянные клеточные линии. Трансформация клеток в культуре имеет полиэтиологическую природу. Спонтанная трансформация культур клеток нормальных тканей — относительно редкое событие. Частоту таких трансформаций можно увеличить, обработав клетки мутагенами или некоторыми вирусами.

Все постоянные клеточные линии, в отличие от культур нормальных клеток с ограниченным сроком жизни, являются трансформированными, т. е. измененными по ряду признаков, главным из которых является «бессмертие». Способность к неопределенно длительному размножению в культуре, как правило, связана с анеуплоидным кариотипом. Некоторые линии клеток (например, фибробластов хомячка — ВНК-21) хотя и обладают правильным диплоидным числом хромосом, но их кариотип, по-видимому, изменен. Другие критерии трансформации (онкогенность, контактное торможение требования к среде) проявляются у различных линий неодинаково.

Все они получены в результате спонтанной или индуцированной трансформации клеток в организме или в культуре. Многие происходят из опухолей животных, хотя не всегда при эксплантации опухолевых клеток in vitro образуются клеточные линии. Линии клеток, полученные непосредственно из опухолевых тканей (т.е. трансформированных в организме), часто сохраняют специализированные функции, например, способность продуцировать некоторые ферменты в течение более продолжительного периода, чем клетки, трансформированные в культуре различными методами (физическими, химическими, вирусными агентами). Частота получения постоянных линий у различных видов млекопитающих неодинакова.

Клетки мышей подвергались спонтанной трансформации значительно чаще, чем клетки человека или других млекопитающих. Указанные различия, по-видимому, связаны с неодинаковой стабильностью кариотипа разных видов животных.

Субкультивирование клеток, а затем и становление постоянной клеточной линии, были более успешными, когда первичную однослойную культуру получали путем посева механически измельченной ткани, чем из суспензии трипсинизированных клеток. Возможно, это связано с уменьшением количества белка в поверхностных структурах клеток в результате обработки трипсином. Для трансформации клеток часто используют вирусы. Клетки почки новорожденного хомяка (ВНК), например, легко трансформируются вирусом полиомы или вирусом SV-40, а клетки эмбриона хомяка - герпесвирусом типа 3 лошадей. В последнем случае клеточные линии экспрессировали вирус-специфические белки, но не продуцировали вирусного потомства.

Трансфекция культуры клеток почки эмбриона человека онкогеном вируса SV-40 увеличивала период размножения in vitro от 15-20 до 70-90 поколений. Из популяции таких клеток удалось выделить две постоянные линии, практически не имеющие признаков трансформации. В результате трансфекции гепатоцитов нормальных крыс ДНК вируса SV-40 получена серия клеточных линий SV-40 гепатоцитов. С помощью рекомбинантного вектора SV-40-аденовируса получены различающиеся по свойствам постоянные линии клеток стромы костного мозга человека, экспрессирующие большой Т-антиген вируса SV-40. Т-штамм вируса ретикулоэндотелиоза кур вызывал трансформацию культур клеток печени, селезенки, костного мозга, а также тимуса куриных эмбрионов и молодых цыплят. Подавляющее большинство трансформированных линий клеток секретировало вирус, вызывающий летальный ретикулоэндотелиоз у 1—2-дневных цыплят.

Предпочтительными сайтами интеграции вирусного генома оказались ломкие участки в геноме млекопитающих, что обусловлено, по-видимому, их структурными и функциональными особенностями. Результатом взаимодействия вирусного и клеточного геномов могут явиться хромосомные аномалии и приобретение клетками способности к неограниченному размножению.

При длительном культивировании клеточные линии могут изменять те или иные свойства, поэтому для поддержания исходных свойств расплодки клеток, их хранят при низкой температуре и периодически берут для размножения и практического использования. Например, в процессе многих циклов выращивания клеток ВНК-21 в однослойной культуре могут значительно изменяться их первоначальные свойства. Нормальный равномерный рост фибробластоподоб-ных клеток может смениться ростом эпителиоподобных клеток, образующих слои и грозди. От свойств сыворотки также зависит скорость роста клеток и чувствительность к разным типам и штаммам вируса ящура.
Большинство таких изменений характерно для трансформированных клеток других линий.

- Читать далее "Виды культур клеток в биотехнологии вирусов. Культуры лимфобластоидных и миеломных клеток."


Оглавление темы "Биотехнологии в вирусологии.":
1. Дефектные интерферирующие вирусные частицы. ДИ-частицы вирусов.
2. Типы взаимодействия вирусов с клетками. Особенности воздействия вирусов на клетки.
3. Культивирование вирусов. Биотехнологии в вирусологии.
4. Опасность культивирования вирусов. Осложнения вирусной биотехнологии.
5. Среды для выращивания вирусов. Клеточные субстраты в вирусологии.
6. Постоянная клеточная линия для выращивания вирусов. Непрерывное культивирование вирусов.
7. Виды культур клеток в биотехнологии вирусов. Культуры лимфобластоидных и миеломных клеток.
8. Контаминация клеточных культур в вирусологи. Загрязнение культуры с вирусами.
9. Вирусная контаминация в вирусологи. Борьба с вирусной контаминацией.
10. Проверка клеточной культуры на контаминацию вирусами. Вирусы контаминирующие клеточные культуры.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта