MedUniver Микробиология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Микробиология:
Общая микробиология
Общая бактериология
Экология микробов
Учение об инфекции
Лечение инфекций
Иммунология
Методы диагностики
Грам "+" бактерии
Грам "-" бактерии
Микобактерии
Хламидии. Риккетсии
Спирохеты. Трепонемы
Вирусы
Грибы
Простейшие
Гельминтозы
Санитарная микробиология
Книги по микробиологии
Рекомендуем:
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Проверка клеточной культуры на контаминацию вирусами. Вирусы контаминирующие клеточные культуры.

Первичные культуры клеток животных проверяют на вирусную контаминацию, используя различные вирусологические, серологические, физические и молекулярно-биологические методы.

Теоретически все вирусы, встречающиеся у данного вида животных, могут загрязнять клеточные культуры, приготовленные из их тканей. Однако на основании практических наблюдений определены наиболее часто встречаемые вирусы, загрязняющие первичные клеточные культуры, а в итоге и культуральные вирусные препараты.
В таблице приведены наиболее вероятные вирусные контаминанты клеточных культур шести видов домашних животных.

Хотя получение исходного клеточного материала от животных, выращенных в контролируемых условиях, — шаг вперед, однако эта мера не является исчерпывающей гарантией чистоты клеточного субстрата. Вирусная контаминация выявлена у многих линий клеток. Клетки ВНК-21 были контаминированы парвовирусом или короноподобным вирусом. Парвовирус обнаружен во многих клеточных линиях. Линия клеток почки поросенка (IBP-2) оказалась персистентно инфицированной авирулентным штаммом вируса классической чумы свиней, который попал в первичную культуру, вероятно, с клетками ранее вакцинированного животного-донора клеток для культивирования. Различные линии клеток почек свиней оказались инфицированными онкорнавирусом типа С.

Частицы онкорнавирусов типа С и В были обнаружены также во многих линиях клеток человека и животных. Практически в каждой постоянной линии клеток можно обнаружить эндогенные ретровирусы или ретровирусоподобные частицы. Однако экспрессия их генетической информации зависит от типа клеток. Потенциальная опасность таких вирусов связана с их сходством с онкогенными ретровирусами. Оценка экспрессии ретровирусов - трудная задача, требующая комплексного решения. В постоянной линии клеток яичника китайского хомяка с встроенным фрагментом ДНК, кодирующим HBs-антиген вируса гепатита В (CHO/HBsAg), обнаружено небольшое количество эндогенных ретровирусо-подобных частиц типа С при отсутствии их биологической активности.

таблица: вирусы контаминирующие клеточные культуры

Постоянная линия клеток, полученная из злокачественной лимфомы свиньи, продуцировала ретровирус свиней. В основе системы контроля постоянной линии клеток, исключающей случайную контаминацию при изготовлении вирусных вакцин, лежит создание банка хорошо проконтролированных клеточных линий и расплодок клеток, используемых в производственных целях в течение не более 20 пассажей. Все линии клеток проверяют на бактериальные, грибковые и вирусные загрязнения.

Известно, что сыворотка крови животных является потенциальным источником вирусной контаминации. Особенно хорошо изучена контаминация сыворотки крови крупного рогатого скота. Вирусы довольно часто обнаруживали в сыворотке крови эмбрионов телят и взрослого скота. Наиболее частые контаминанты сыворотки — микоплазмы и вирус диареи крупного рогатого скота.

По этой причине линии клеток различного происхождения оказались хронически инфицированными вирусом диареи крупного рогатого скота. В их числе были перевиваемые клетки крупного рогатого скота (линии MDBK, GBK, BKD, ВК4 и др.), лошадей, свиней, овец, кроликов, кошек и обезьян. Методом иммунофлюоресценции установлено инфицирование вирусом диареи крупного рогатого скота многих культур клеток американской коллекции, полученных от крупного рогатого скота, свиней, обезьян, кошки и москитов. Различные первичные культуры и постоянные линии клеток в некоторых случаях оказались контаминированы полиомавирусом, источником которого была сыворотка инфицированного крупного рогатого скота. У людей, тесно контактировавших с таким скотом, обнаружены специфические антитела.

Вновь приготовленные серии сыворотки крупного рогатого скота обычно контролируют на отсутствие вирусного загрязнения в первичных культурах клеток куриных эмбрионов, почек телят и культуре клеток HeLa. Кроме исследования под микроскопом, культуры проверяют на гемадсорбирующие свойства с эритроцитами человека, кур и морских свинок. С целью повышения эффективности проверки коммерческих партий сыворотки на наличие микоплазмы рекомендована предварительная инкубация проб перед высевом на элективную среду. Образцы сыворотки центрифугировали при 100000 g, осадок ресуспендировали в небольшом объеме среды и вносили в культуры клеток, а также исследовали под электронным микроскопом. Наиболее часто контаминированной оказалась сыворотка крупного рогатого скота (13%). Значительно реже микоплазмы обнаруживают в партиях сыворотки овец (3,2%) и эмбрионов коров (3,1%).

Для стерилизации сыворотки предложена специальная ультрафиолетовая обработка, а также инактивация бетапропиолактоном, которые не ухудшают ее ростовых свойств. Положительные результаты получены при стерилизации сыворотки перуксусной кислотой.

Прогревание сыворотки при температуре 56 °С в течение 30 мин может служить эффективной мерой инактивации микоплазм и некоторых вирусов, присутствующих в ней в качестве контаминантов. Однако при этом снижаются ростовые свойства сыворотки.

Профилактика контаминации сыворотки заключается в тщательном отборе сыворотки и облучении ее гамма-лучами при — 40°С в дозе 2,5—3,5 мегарад. Гамма-облучение эффективно инактивирует и микоплазмы, причем при использовании 10% облученной сыворотки в питательной среде не отмечается нежелательного воздействия на рост клеток или их чувствительность к вирусам. Для сохранения ростовых факторов эмбриональной сыворотки применяют специальные приемы, к числу которых относится сохранение сыворотки в замороженном состоянии до облучения, во время него и после него. Причиной контаминации клеточных культур парвовирусом свиней явились коммерческие партии трипсина Дифко. Сухой трипсин можно деконтаминировать гамма-облучением без потери его протеолитической активности.

В связи с возможностью латентного инфицирования клеточных линий патогенными вирусами, представляющими большую потенциальную опасность, в США введены ограничения на ввоз культивируемых клеток (особенно гибридов). Прежде всего, имеется в виду возможность заноса в страну вируса ящура, источником которого может служить сыворотка, применяемая при культивировании клеток.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."


Оглавление темы "Биотехнологии в вирусологии.":
1. Дефектные интерферирующие вирусные частицы. ДИ-частицы вирусов.
2. Типы взаимодействия вирусов с клетками. Особенности воздействия вирусов на клетки.
3. Культивирование вирусов. Биотехнологии в вирусологии.
4. Опасность культивирования вирусов. Осложнения вирусной биотехнологии.
5. Среды для выращивания вирусов. Клеточные субстраты в вирусологии.
6. Постоянная клеточная линия для выращивания вирусов. Непрерывное культивирование вирусов.
7. Виды культур клеток в биотехнологии вирусов. Культуры лимфобластоидных и миеломных клеток.
8. Контаминация клеточных культур в вирусологи. Загрязнение культуры с вирусами.
9. Вирусная контаминация в вирусологи. Борьба с вирусной контаминацией.
10. Проверка клеточной культуры на контаминацию вирусами. Вирусы контаминирующие клеточные культуры.
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта