Исследование фибринолиза - время расплавления эйглобулинового сгустка - методика, показатели нормы
Методы исследования фибринолиза прямые, когда ими измеряется активность плазмина и циркулирующих плазматических активаторов, и считаются косвенными, когда определяют последствия фибринолиза в отношении фибрина, фибриногена и прочих плазматических факторов.
К первой категории относятся: расплавление эйглобулинового сгустка (которым измеряется фибринолитическое действие на субстрат эндогенного фибрина) и метод Аструпа (определяющего фибринолитическое действие в отношении экзогенного субстрата фибрина).
Время расплавления эйглобулинового сгустка
Принцип исследования времени расплавления эйглобулинового сгустка состоит в следующем:
а) диссоциация комплекса активаторы-ингибиторы путем разведения плазмы;
б) выпадение эйглобулинов с помощью уксусной кислоты; при этом осадок содержит лишь свертывающие и пролитические факторы, в то время как ингибиторы остаются в надосадочной массе;
в) определение фибринолитической активности слежением за расплавлением эйглобулинового сгустка, полученного с помощью СаС12 в растворе преципитата растворенного буфером.
Техника исследования времени расплавления эйглобулинового сгустка. За 12 часов до исследования данное лицо не должно: получать жирную пищу, утомляться или волноваться. В пробирку для центрифуги, содержащей 9 мл дистилированной воды, влить 0,5 мл, лишенной тромбоцитов плазмы. Добавить 0,08 мл 1% уксусной кислоты, в результате чего показатель водорода будет приведен к 6,35±0,10 (такое понижение показателя водорода способствует выпадению эйглобулинов).
На 15 мин. вложить пробирку в холодильник, при температуре + 4°С, где произойдет полное преципитирование эйглобулинов. Далее процентрифугировать 5 мин. при 3000 об./мин. для отложения осадка, а следовательно его отделения от надосадочной массы. В осадке содержатся факторы свертывания и пролитические факторы фибринолитической системы, в то время как в надосадочной массе, которую необходимо слить из пробирки — противолитические факторы (ингибиторы).
Поставить пробирку горлышком вниз на фильтровальную бумагу, чтобы стекли последние капли надосадочной массы, внутренние стенки пробирки слегка обтереть фильтровальной бумагой. Поверх эйглобулин-ного осадка налить 0,5 мл буфера-борат, который растворит его. Пробирку погрузить в ванну, температурой 37°С и для активации растворения тонкой палочкой слегка помешивать содержимое пробирки. Резкие движения могут способствовать образованию отдельных нитей фибрина, неблагоприятно влияющих на дальнейшее образование сгустка.
После окончательного растворения добавить 0,5 мл 0,025 М СаСl2, после чего, примерно за 5 мин., дно пробирки покрывается образующимся сгустком, включающим всю массу раствора. Одновременно отметить время. Далее оставить пробирку в ванне, в состоянии полного покоя, и через каждые 15 мин. бережным наклонением пробирки проверять эволюцию образовавшегося эйглобулинового сгустка. Отметить час полного исчезновения сгустка эйглобулина. Время расплавления этого сгустка отсчитывается от его образования, до полного растворения.
Результаты исследования времени расплавления эйглобулинового сгустка. В отношении женщин норму составляет 180±30 мин., в то время как для мужчин 150±30 мин.
Метод Аструпа
Метод Аструпа применяется для исследования фибринолиза на пластинках фибрина.
На поверхность фибринного геля (образованного в камере Петри из раствора фибриногена и тромбина) нанести каплю раствора, фибринолитическую активность которого желаем определить, в том числе патологическая плазма, эйглобулиновый раствор или моча. После 18-часовой инкубации при температуре 37°С измерить поверхность расплавления, появившегося вокруг капли (для расчета помножить 2 перпендикулярных диаметра расплавленного участка).
