Современный алгоритм диагностики вирусных гепатитов у детей
Алгоритм диагностики гепатитов в качестве внутрибольничного стандарта предполагает 2 этапа обследования — первичный скрининг и в зависимости от сочетания выявленных серологических маркеров («профиля») — проведение второго этапа серологической диагностики. Первичный скрининг включает определение HBsAg, anti-HB cor IgM, anti-HCV IgG, anti-HAV IgM.
Выбор оптимального объема исследований для верификации этиологии гепатита особенно актуален в детском отделении с учетом необходимости быстрого получения результатов, их достаточной информативности, ограничения инвазивных вмешательств, в том числе повторных заборов крови, исключения немотивированных затрат. Исходя из этого, мы включали в объем первичного скрининга HBsAg, anti-HAV IgM, количественное определение anti-HCV IgG core, anti-HCV IgG NS 3-5, а также исследования anti-HIV, RW.
В случае обнаружения маркеров вирусов В и С проводили второй этап серологической диагностики. У больных с маркерами HBV исключали HDV-инфекцию, определяли маркеры, позволяющие установить фазу процесса — anti-HB cor IgM и суммарные, HBeAg, DNA HBV. В случае обнаружения в скрининге anti-HCV исследовали маркер репликации вируса RNA HCV и его генотип. При проведении второго этапа для исключения возможной лабораторной ошибки обязательно повторяли определение маркеров первичного скрининга HBsAg и anti-HCV.
Если есть основания для подозрения у ребенка HCV-инфекции, но серологические маркеры у него обнаружить не удается, необходимо провести исследование в динамике для исключения так называемого «серонегативного окна». Обследование необходимо продублировать, в том числе с использованием метода ПЦР. В то же время следует учитывать возможность ложноположительных или ложноотрицательных результатов.
Кроме того, в настоящее время установлено, что RNA HCV может не определяться в крови вследствие неустойчивой виремии, возможной низкой вирусной нагрузки или индивидуальных особенностей иммунологигеского статуса ребенка.
Таким образом, серологические критерии разграничения фаз HCV-инфекции следует рассматривать только в динамике, с оценкой анамнеза и динамики клинигеских проявлений.
Центром детской гепатологии Детской инфекционной больницы Тулы накоплен определенный опыт использования специфических маркеров вирусов гепатитов с целью дифференциальной диагностики болезней печени у детей.
В повседневной практике использовали метод ПЦР для детекции нуклеиновых кислот вирусов гепатитов с целью уточнения фазы заболевания (репликации или интеграции), определяющей тактику лечения, и контроля его эффективности. У больных, у которых была выявлена микст-инфекция, определяли роль каждого вируса в гепатитной инфекции, дифференцируя этиологически значимый от маркеров предшествующего инфицирования. При поступлении детей с угрозой реализации перинатальной HCV/HBV инфекции обследовали ребенка и маму.
Всего проведено более четырех тысяч определений вирусных нуклеиновых кислот. Исследования проводили в лабораториях идентификации вирусов гепатитов НИИ ЭМ им. Н. Ф. Гамалеи и в Центре молекулярной диагностики ЦНИИЭ МЗ РФ. Оформление корпоративного договора стационара с лабораторией значительно снижает стоимость анализа, которая и без того минимальна. Невозможно согласиться с аргументами о «высокой стоимости» метода полимеразной цепной реакции, трудностях забора у детей и доставки материала в специализированные лаборатории, огранивающих их применение.
Проведение ПЦР-диагностики связано с проблемой возможной контаминации, обусловленной высокой чувствительностью метода. Попадание в реакционные пробирки следовых количеств ДНК /РНК приводит к ложноположительным результатам. Для исключения такой возможности забор крови больного осуществляли в одноразовые полипропиленовые (1,5 мл) пробирки с раствором ЭДТА. В последние годы используем специальные вакуумные наборы, исключающие всякий контакт с материалом. Для предупреждения ложноотрицательных результатов материал доставляем в лабораторию в течение трех-четырех часов после забора, в специальном контейнере.
Необходимо обратить внимание на соответствие диагностических наборов, включающих компоненты и реактивы для постановки тестов, требованиям, исключающим неспецифические (ложноположительные) и ложноотрицательные результаты. К сожалению, периодически такие ситуации имели место в лаборатории города, в частности, при определении маркера вирусного гепатита A (anti-HAV IgM). Достоверность результатов особенно актуальна в случае тяжести состояния ребенка, требующей срочного перевода в специализированное соматическое отделение для верификации диагноза и определения адекватной терапии.
Мы убедились в том, гто усилия, связанные с исключением большого числа преаналитигеских и аналитигеских факторов, влияющих на достоверность и точностъ результатов исследований, требующих специальных условий (прежде всего, ПЦР), в том гисле доставка материала в специализированную лабораторию Москвы, оправданы, так как исключают ошибочный диагноз.
