MedUniver Стоматология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Стоматология:
Стоматология
Анатомия полости рта
Аномалии прикуса
Болезни окружения зубов
Заболевания полости рта
Операции в полости рта
Протезирование зубов
Протезирование коронками
Протезирование мостовидными протезами
Протезное ложе
Рекомендуем:
Остальные разделы:
Абдоминальная хирургия
Анатомия человека
Акушерство
Биология
Генетика
Гепатология
Гигиена труда
Гинекология
Гистология
Дерматология
Оз и Оз
Кардиология
Лучевая медицина
Микробиология
Неврология
Неотложная хирургия
Отоларингология
Офтальмология
Профилактика заболеваний
Психология
Пульмонология
Физиология человека
Скорая помощь
Стоматология
Топографическая анатомия
Травматология
Фармакология
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Ценность иммунохимических методов анализа. Гибридизация in situ в стоматологии

Флюоресцентно меченные антитела используются для молекулярной диагностики поверхностных антигенов, таких как капсулярные, флагеллярные белки, полисахариды, или внутриклеточных антигенов (рибосомные белки, или белки, специфические для цитоплазматических протеинов).

Иммунохимические методы ограниченно пригодны для идентификации микроорганизмов, поскольку с их помощью сложно разграничить штаммы одного и того же вида (обладают сходными антигенными детерминантами и возможны ложноположительные результаты), и непригодны для определения некультивируемых микроорганизмов, так как невозможно получить очищенные антигены для иммунизации животного.

Решением этой проблемы могут служить антитела с флюоресцентной меткой, специфически взаимодействующие с определенной последовательностью нуклеотидов рибосомной РНК.

зубная бляшка под микроскопом

Гибридизация in situ в стоматологии

Гибридизация in situ — это молекулярно-биологический метод, основанный на специфической гибридизации специального олигонуклеотидного зонда с РНК рибосомы. Рибосомы присутствуют во всех клетках, и их структура хорошо изучена. Определенные участки рибосомной РНК не покрыты белками и могут взаимодействовать по принципу комплементарности с нуклеотидными зондами, помеченными флюоресцентными красителями или антителом. Последовательность нуклеотидов зонда подбирается таким образом, чтобы связываться с рРНК только одного вида клеток, что позволяет выявлять такие клетки под микроскопом. Процедура гибридизации in situ следующая: клетки фиксируются (на подложке или в тонком срезе) и в процессе фиксации погибают. Мертвая клетка становится проницаемой для крупных молекул, в том числе для олигонуклеотидных зондов.

На слой клеток наносится краситель с зондами, которые проникают внутрь клетки, связываются там с рРНК, если она комплементарна их последовательности. Через некоторое время избыточное количество красителя отмывают, а связавшиеся зонды обнаруживают микроскопически по развитию той или иной окраски. Если целевых последовательностей рРНК нет, то цветной реакции не наблюдается. При использовании флюоресцентных красителей метод называется FISH — флюоресцентная гибридизация in situ.

Метод достаточно прост и в соединении с проточной цитометрией используется для количественного анализа микробных сообществ. Кроме того, с его помощью можно выявлять растущие молодые клетки, в которых много действующих рибосом и, следовательно, окраска у них более интенсивная.

Последние модификации данного метода позволяют обнаруживать низкокопийные плазмиды (от 10 до 1000 копий на клетку) или хромосомы (менее 10 копий). Эти методы отличаются от pPHK-FISH использованием полинуклеотидных зондов (от 50 до 1200 нуклеотидов в длину), высокой (1000-кратной) концентрацией зонда и более долгим временем гибридизации. Техника называется RING-FISH из-за того, что вокруг целевых клеток образуется круговое сияние флюоресценции. Метод также может быть использован для обнаружения клеток, зараженных вирусом или внутриклеточными паразитами.

При всех своих достоинствах метод обладает определенными ограничениями. Во-первых, для эффективного микроскопирования клетки обязательно нужно концентрировать, что не всегда возможно. Во-вторых, при фиксации клеток структура рибосом нередко изменяется таким образом, что целевой участок рРНК становится физически недоступным для зонда и приходится применять особые техники (добавление формамида) для его обнаружения. В-третьих, медленно растущие клетки трудно обнаружить из-за низкого количества в них рибосом.

- Читать далее "Полимеразная цепная реакция в стоматологии. Ценность ПЦР для стоматолога"


Оглавление темы "Диагностические методы в стоматологии":
1. Микроскопия и культивирование в стоматологии. Определение чувствительности к антибиотикам
2. Биохимические методы идентификации в стоматологии. Биохимия зубных бактерий
3. Капиллярный электрофорез в стоматологии. Иммунохимические методы анализа
4. Ценность иммунохимических методов анализа. Гибридизация in situ в стоматологии
5. Полимеразная цепная реакция в стоматологии. Ценность ПЦР для стоматолога
6. Современная молекулярная диагностика в стоматологии. Ценность молекулярной диагностики
7. Сочетание ПЦР и культивирования. Ценность методов культивирования в стоматологии
8. Исследования иммунитета в стоматологии. Оценка местного иммунитета
9. Иммуногистология заболевания пародонта. Функциональная активность ПМЯЛ
10. Специфические факторы защиты пародонта. Цитотоксические реакции
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта