MedUniver Стоматология
  Домой Медицинский фото атлас Психология отношений Медицинские видео ролики Медицинская библиотека Консультация врача  
Стоматология:
Стоматология
Анатомия полости рта
Аномалии прикуса
Болезни окружения зубов
Заболевания полости рта
Операции в полости рта
Протезирование зубов
Протезирование коронками
Протезирование мостовидными протезами
Протезное ложе
Рекомендуем:
Остальные разделы:
Абдоминальная хирургия
Анатомия человека
Акушерство
Биология
Генетика
Гепатология
Гигиена труда
Гинекология
Гистология
Дерматология
Оз и Оз
Кардиология
Лучевая медицина
Микробиология
Неврология
Неотложная хирургия
Отоларингология
Офтальмология
Профилактика заболеваний
Психология
Пульмонология
Физиология человека
Скорая помощь
Стоматология
Топографическая анатомия
Травматология
Фармакология
Необходимое:
Книги по медицине
Видео по медицине
Фотографии по медицине
Консультации врачей
Форум
 

Капиллярный электрофорез в стоматологии. Иммунохимические методы анализа

Капиллярный электрофорез — относительно новый метод идентификации микроорганизмов Он основан на разделении одиночных клеток в электрическом поле в соответствии с их поверхностным зарядом. Этот заряд формируется за счет ионизации основных или кислотных группировок (карбокси-, амино-, органофосфатных групп, иногда сульфатных) на поверхности клетки, зависит от свойств клетки: ее типа, возраста, физиологических условий — и может изменяться после дифференцировки, обработки антибиотиками, химическими веществами.

Клеточная стенка грамотрицательных микробов состоит из трех слоев: бислой липидов, тонкий слой пептидогликанов, внешний двойной слой, покрытый липополисахаридами. Последние и формируют заряд грамотрицательных микроорганизмов. Грамположительные микробы имеют на поверхности толстый слой пептидогликанов, в составе которых преобладает тейхоевая кислота, за счет нее формируется отрицательный заряд. Вирусы имеют внешний белковый слой на мембране. Остатки аминокислот также способны заряжаться. Мембраны и клеточная стенка грибов содержат белки и липидные молекулы, придающие им характеристический заряд в зависимости от рН, вида ионов, состава электролитов и температуры. При этом многие бактерии могут соединяться в цепочки и кластеры, что тоже будет выявлено их движением в электрическом поле. Клетки легко можно сделать видимыми, окрашивая их флюоресцентными красителями.

Капиллярный электрофорез — быстрый, с высокой разрешающей способностью метод с минимальной подготовкой образца. Недостатками метода являются требовательность в подготовке образцов клеток к анализу, поскольку уже небольшое изменение рН, концентрации ионов, кислорода приводит к изменению заряда и невоспроизводимым результатам, и небольшое количество клеток, которые можно анализировать одновременно, — от 3 до 15.

электрофорез в стоматологии

Иммунохимические методы анализа, основанные на специфическом связывании определяемого соединения соответствующими антителами, вошли в аналитическую практику и широко используются в различных областях медицины. Как правило, к антителу прикрепляется метка, которая обнаруживает себя при образовании комплекса «антиген — антитело». В качестве метки может использоваться фермент, осуществляющий цветную реакцию (иммуноферментный анализ), или флюоресцентный краситель (иммунофлюоресценция).

Антигеном — веществом, против которого могут быть получены антитела, могут являться белки, полисахариды, реже — нуклеиновые кислоты, т. е. довольно крупные молекулы или клетки, на поверхности которых такие молекулы имеются. Таким образом, иммунохимические методы выявляют не возбудителя заболевания, а молекулы, сопутствующие ему, следовательно, они являются непрямыми методами анализа.

Эпитопы распознаются антителами с достаточно высокой специфичностью: разные антитела образуются уже при перемещении одной и той же группировки к соседнему атому углерода.

Количество эпитопов — участков поверхности антигена, с которыми может связываться антитело, принципиально не ограничено и составляет до десятков у крупных белков.

Наибольшее распространение среди ферментов в настоящее время получили пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза. Для фотометрической регистрации активности пероксидазы предпочтительным в настоящее время является использование субстрата тетраметилбензидина. После остановки ферментативной реакции серной кислотой измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 450 нм. Анализ проводят следующим образом. В лунки полистирольного планшета с сорбированными в них антителами вносят анализируемый образец, инкубируют в течение 1 ч, при этом анализируемый антиген вступает в реакцию с антителами и образует иммунокомплекс на поверхности лунок. Планшет отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом антитела. После вторичной инкубации и удаления избытка меченых антител добавляют субстрат фермента и определяют скорость его превращения в окрашенный продукт, которая пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена.

Для получения антител к нужному антигену (например, к поверхностному полисахариду микроорганизма) антиген нужно получить в чистом виде и иммунизировать им животное (обычно кролика). Антитела, которые образуются в крови иммунизированного животного, связываются с различными эпитопами молекулы-мишени. Такую смесь антител называют поликлональным препаратом.

Проблемы виммунохимического анализа полне разрешимы при использовании моноклональных антител, реагирующих с одним-единственным эпитопом на поверхности молекулы-мишени. Однако препараты моноклональных антител дороги, так как их получают из генно-инженерной культуры клеток, а также зачастую имеют сравнительно низкое сродство к субстрату, низкую аффинность.

- Читать далее "Ценность иммунохимических методов анализа. Гибридизация in situ в стоматологии"


Оглавление темы "Диагностические методы в стоматологии":
1. Микроскопия и культивирование в стоматологии. Определение чувствительности к антибиотикам
2. Биохимические методы идентификации в стоматологии. Биохимия зубных бактерий
3. Капиллярный электрофорез в стоматологии. Иммунохимические методы анализа
4. Ценность иммунохимических методов анализа. Гибридизация in situ в стоматологии
5. Полимеразная цепная реакция в стоматологии. Ценность ПЦР для стоматолога
6. Современная молекулярная диагностика в стоматологии. Ценность молекулярной диагностики
7. Сочетание ПЦР и культивирования. Ценность методов культивирования в стоматологии
8. Исследования иммунитета в стоматологии. Оценка местного иммунитета
9. Иммуногистология заболевания пародонта. Функциональная активность ПМЯЛ
10. Специфические факторы защиты пародонта. Цитотоксические реакции
Загрузка...

   
MedUniver.com
ICQ:493-344-927
E-mail: reklama@meduniver.com
   

Пользователи интересуются:

Будем рады вашим вопросам и отзывам:

Полная версия сайта